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抗整合素β3胞外区噬菌体抗体库的构建及筛选
引用本文:杨俊涛,李正强,王清明,陈吉中,范国才,陈惠鹏.抗整合素β3胞外区噬菌体抗体库的构建及筛选[J].生物技术通讯,2004,15(6):552-556.
作者姓名:杨俊涛  李正强  王清明  陈吉中  范国才  陈惠鹏
作者单位:1. 军事医学科学院,放射医学研究所,北京,100850;吉林大学,分子酶学教育部重点实验室,长春,130023
2. 吉林大学,分子酶学教育部重点实验室,长春,130023
3. 军事医学科学院,放射医学研究所,北京,100850
4. 军事医学科学院,生物工程研究所,北京,100071
摘    要:用RT-PCR的方法从人胶质瘤BT-325细胞中扩增人整合素β3胞外区,并克隆到载体pET-24a中构建表达载体.表达的人整合素β3胞外区经变性、复性和纯化后免疫BALB/c小鼠,提取脾脏总RNA,用RT-PCR技术扩增小鼠抗体重链(VH)和轻链(VL)可变区基因,经重叠PCR(SOE-PCR)将VH和VL连接成单链抗体(scFv)基因,并克隆到噬菌粒载体pCANTAB5E中,电转化至大肠杆菌TGl,经辅助噬菌体M13KO7超感染,构建噬菌体单链抗体库.通过淘选从该抗体库中筛选特异性识别人整合素β3胞外区的噬菌体单链抗体.结果表明,成功构建了库容为2.6×106的抗人整合素β3胞外区的单链抗体库,初步筛选到了与人整合素β3胞外区特异性结合的单链抗体.

关 键 词:整合素β3  单链抗体  胞外区  噬菌体抗体库  扩增  胶质瘤  ET  电转化  重叠PCR  特异性识别
文章编号:1009-0002(2004)06-0552-05
修稿时间:2004年5月20日

Construction and screening of phage display antibody library directed against the extracellular domain of human integrin β3
YANG Jun-tao,LI Zheng-qiang,WANG Qing-ming,CHEN Ji-zhong,FAN Guo-cai,CHEN Hui-peng.Construction and screening of phage display antibody library directed against the extracellular domain of human integrin β3[J].Letters in Biotechnology,2004,15(6):552-556.
Authors:YANG Jun-tao    LI Zheng-qiang  WANG Qing-ming  CHEN Ji-zhong  FAN Guo-cai  CHEN Hui-peng
Institution:YANG Jun-tao1,3,LI Zheng-qiang3,WANG Qing-ming1,CHEN Ji-zhong1,FAN Guo-cai1,CHEN Hui-peng21. Institute of Radiation Medicine,Academy of Military Medical Sciences,Beijing 100850, 2. Institute of Biotechnology,Academy of Military Medical Sciences,Beijing 100071, 3. Key Lab for Molecular Enzymology and Engineering of Ministry of Education,Jilin University,Changchun,130023,China
Abstract:
Keywords:
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