| 重组质粒pUDKH的质量分析 |
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| 引用本文： | 张庆林,肖凤君,毕建进,刘红军,段海峰,劳妙芬,吴祖泽.重组质粒pUDKH的质量分析[J].生物技术通讯,2006,17(5):733-736. |
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| 作者姓名： | 张庆林 肖凤君 毕建进 刘红军 段海峰 劳妙芬 吴祖泽 |
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| 作者单位： | 北京放射与辐射医学研究所,北京,100850 |
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| 基金项目： | 国家高技术研究发展计划(863计划) |
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| 摘 要： | 目的:分析研究pUDKH的质量。pUDKH是由本实验室构建的携带人肝细胞生长因子(HGF)基因的真核表达质粒,具有治疗肢体动脉闭塞病的应用潜能。方法:用光密度法分析pUDKH的浓度及纯度;用0.8%琼脂糖凝胶电泳分析超螺旋pUDKH比例及RNA;以地高辛标记的核酸探针固相斑点杂交法测定残留宿主DNA含量;用酶联免疫法测定残留宿主菌蛋白;以4组限制性内切酶分析一致性;PCR扩增目的基因片段;抑菌圈测定板测定残余抗生素;用鲎试剂检测细菌内毒素;对CHO细胞进行基因转染;ELISA检测上清HGF表达量;用Transwells法分析表达的上清液诱导ECV304细胞迁移数。结果:03批次pUDKH的浓度为1.97mg/mL,D260nm/D280nm值为1.84,超螺旋pUDKH比例为95.5%;电泳图谱中未见RNA;残留宿主DNA含量低于质粒DNA的0.2%;菌体蛋白质残留含量低于质粒DNA的0.1%;限制性酶切图谱与自行制备的对照品一致;PCR扩增到HGF基因片段,长约2.2kb;未见残余抗生素(卡那霉素)抑菌圈;细菌内毒素≤0.03125EU/mL;转染的CHO细胞上清HGF表达量为39.32ng/mL;表达的上清诱导ECV304细胞迁移数高于对照组2倍。结论:03批次pUDKH的质量符合药学规格。
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| 关 键 词： | 重组质粒 pUDKH 基因治疗 质量 分析 |
| 文章编号： | 1009-0002(2006)05-0733-04 |
| 收稿时间： | 11 28 2005 12:00AM |
| 修稿时间： | 2005年11月28 |
Quality Analysis of Recombinant Plasmid pUDKH |
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| ZHANG Qing-lin,XIAO Feng-jun,BI Jian-jin,LIU Hong-jun,DUAN Hai-feng,LAO Miao-fen,WU Zu-ze.Quality Analysis of Recombinant Plasmid pUDKH[J].Letters in Biotechnology,2006,17(5):733-736. |
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| Authors: | ZHANG Qing-lin XIAO Feng-jun BI Jian-jin LIU Hong-jun DUAN Hai-feng LAO Miao-fen WU Zu-ze |
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| Institution: | Beijing Institute of Radiation Medicine, Beijing 100850, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | recombinant plasmid pUDKH gene therapy quality analysis |
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