| 肠出血性大肠杆菌Ⅲ型分泌系统ATP水解酶escN基因突变株的构建 |
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| 引用本文： | 陈芳红,李涛,王慧.肠出血性大肠杆菌Ⅲ型分泌系统ATP水解酶escN基因突变株的构建[J].生物技术通讯,2015(3):346-348. |
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| 作者姓名： | 陈芳红 李涛 王慧 |
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| 作者单位： | 安徽医科大学;军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室 |
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| 摘 要： | 目的:利用λ噬菌体的Red重组系统敲除肠出血性大肠杆菌O157∶H7的Ⅲ型分泌系统ATP水解酶Esc N,构建大肠杆菌esc N基因缺失突变株。方法:以O157∶H7为模板,PCR扩增目的基因两侧的同源臂序列,分别酶切连接于p UC19-kan质粒上,PCR获得中间嵌合卡那霉素抗性基因(带有FRT位点)的同源线性片段,利用质粒p KD46和p CP20介导的重组技术敲除esc N基因,并去除抗性标记;PCR及测序验证目的基因缺失后,测定缺失株及野生菌株的生长曲线。结果:敲除了肠出血性大肠杆菌O157∶H7的esc N基因,突变株与野生株的生长曲线相近。结论:构建了Ⅲ型分泌系统缺陷菌株,为进一步研究Ⅲ型分泌系统因子在肠出血性大肠杆菌致病过程中的作用奠定了基础。
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| 关 键 词： | 肠出血性大肠杆菌O157∶H7 Ⅲ型分泌系统 Red重组系统 |
Construction of Type Ⅲ Secretion ATPase escN Gene Defective Mutant of Enterohemorrhagic Escherichia coli |
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