| 雌激素受体α短发夹RNA慢病毒载体的构建及其对乳腺癌干细胞的影响 |
| |
| 引用本文： | 杜佩云,程龙,姜丽娜,陈立涵,林佳佳,叶棋浓,苏金为.雌激素受体α短发夹RNA慢病毒载体的构建及其对乳腺癌干细胞的影响[J].生物技术通讯,2015(3):325-328. |
| |
| 作者姓名： | 杜佩云 程龙 姜丽娜 陈立涵 林佳佳 叶棋浓 苏金为 |
| |
| 作者单位： | 福建农林大学生命科学学院;军事医学科学院生物工程研究所 |
| |
| 摘 要： | 目的:构建特异抑制雌激素受体α(ERα)基因的短发夹RNA(sh RNA)慢病毒表达载体,检测其对ERα的干扰效果,并探讨其对MCF7细胞中乳腺癌干细胞含量的影响。方法:以人的ERα核酸序列为靶标,根据sh RNA设计原则设计并化学合成特异的sh RNA序列,经退火处理后与p SIH-H1质粒连接,转化大肠杆菌DH5α后挑取单克隆并测序;将该克隆进行病毒包装并感染乳腺癌MCF7细胞,用嘌呤霉素进行筛选,最终得到稳定克隆;收取细胞,用Western印迹和q RT-PCR检测ERα在m RNA及蛋白水平上的变化,流式细胞术检测敲低ERα能否影响MCF7乳腺癌干细胞的含量。结果:经测序分析表明目标sh RNA序列成功插入载体,q RT-PCR检测稳定克隆,发现该sh RNA能有效抑制目的基因的m RNA转录水平,同时Western印迹检测发现内源性ERα量明显下降;流式细胞术检测发现ERα敲低的MCF7稳定克隆中雌激素诱导的乳腺癌干细胞含量上升的现象被明显抑制。结论:设计并构建的抑制ERα的sh RNA能够有效抑制ERα的表达,并下调MCF7细胞中乳腺癌干细胞的含量,为研究ERα在乳腺癌干细胞中的功能及机制奠定了实验基础。
|
| 关 键 词： | 雌激素受体α 肿瘤干细胞 短发夹RNA 流式细胞术 |
Construction and Identification of Lentiviral Interference Vector of ERα Gene and its Effect on Breast Cancer Stem Cells |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | |
| 本文献已被 CNKI 万方数据 等数据库收录！ |
|
