首页 | 本学科首页   官方微博 | 高级检索  
   检索      

重组牛肠激酶轻链基因在毕赤酵母中的表达与纯化
引用本文:曹志飞,李新平,范开,李静,梅翔,周振兴.重组牛肠激酶轻链基因在毕赤酵母中的表达与纯化[J].生物技术通讯,2006,17(1):5-8.
作者姓名:曹志飞  李新平  范开  李静  梅翔  周振兴
作者单位:1. 苏州大学生命科学学院,江苏,苏州,215006
2. 重庆富进生物医药有限公司,重庆,400041
基金项目:国家自然科学基金项目(30471250)
摘    要:目的:构建重组牛肠激酶轻链的基因工程菌,并进行表达和纯化,以获得高纯度和高活性的重组牛肠激酶轻链蛋白。方法:以GenBank公共数据库中的牛肠激酶轻链基因序列(AccessionNo.NM174439)设计引物,利用RT-PCR合成牛肠激酶轻链基因片段,并克隆进pPIC9K载体,同时在基因N端插进6个组氨酸标签,转化毕赤酵母GS115,进行筛选和诱导表达。产物经镍离子螯和层析和Q-SepharoseFF柱纯化,并酶切融合蛋白检测其活性。结果:培养液中重组牛肠激酶轻链蛋白表达量为3.0mg/L。对含有肠激酶酶切位点的IL-11/MBP融合蛋白进行酶切,结果表明,酶解率可达到90%以上。结论:表达并获得了高纯度的重组肠激酶轻链蛋白,为大规模生产打下了基础。

关 键 词:重组牛肠激酶  毕赤酵母  分泌表达  活性分析
文章编号:1009-0002(2006)01-0005-04
收稿时间:2005-07-10
修稿时间:2005年7月10日

Expression, Purification and Characterization of Bovine Enterokinase Catalytic Subunit in Pichia pastoris
CAO Zhi-fei,LI Xin-ping,FAN Kai,LI Jing,MEI Xiang,ZHOU Zhen-xing.Expression, Purification and Characterization of Bovine Enterokinase Catalytic Subunit in Pichia pastoris[J].Letters in Biotechnology,2006,17(1):5-8.
Authors:CAO Zhi-fei  LI Xin-ping  FAN Kai  LI Jing  MEI Xiang  ZHOU Zhen-xing
Abstract:
Keywords:recombinant bovine enterokinase secreted expression fusion protein activity assay
本文献已被 CNKI 维普 万方数据 等数据库收录!
设为首页 | 免责声明 | 关于勤云 | 加入收藏

Copyright©北京勤云科技发展有限公司  京ICP备09084417号