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| 雌激素受体β潜在磷酸化位点突变体的构建及其活性测定 | |
| 引用本文： | 周岩,丁丽华,程龙,游松,叶棋浓.雌激素受体β潜在磷酸化位点突变体的构建及其活性测定[J].生物技术通讯,2008,19(5):670-672. |
| 作者姓名： | 周岩 丁丽华 程龙 游松 叶棋浓 |
| 作者单位： | 1. 军事医学科学院,生物工程研究所,北京,100850;沈阳药科大学,辽宁,沈阳,110016 2. 军事医学科学院,生物工程研究所,北京,100850 3. 沈阳药科大学,辽宁,沈阳,110016 |
| 基金项目： | 国家自然科学基金，军队医学科研项目 |
| 摘 要： | 目的：构建雌激素受体（ER）β潜在磷酸化位点突变体,并在人胚肾细胞293T中检测其对ERβ下游基因转录的影响。方法：通过ERα和ERβ序列同源性比对,寻找ERβ的潜在磷酸化位点;以pcDNA3-ERβ-FLAG为模板,通过重组PCR,将ERβ264位、469位Ser编码基因突变为Ala编码基因,将突变片段连接到同样双酶切的pcDNA3-FLAG载体中,Western blot检测其表达;将重组质粒转入293T细胞中,检测突变体对含雌激素应答元件（ERE）的报告基因转录活性的影响。结果：ERα和ERβ序列同源性比对发现ERβ的264位Ser和469位Ser可能是其潜在的磷酸化位点;构建了ERβ264位和469位2个点突变体载体pcDNA3-FLAG-ERβ（S264A）和pcDNA3-FLAG-ERβ（S469A）,Western blot可检测到ERβ突变体融合蛋白在293T细胞中表达。萤光素酶活性检测表明,在没有雌激素刺激的情况下,2个突变体的活性较野生型没有变化;加入雌激素后,突变体的活性较野生型略有升高。结论：ERβ的264位和469位Ser位点的磷酸化可能不是ERβ调节下游基因转录所必需的,活性升高可能是由于ERβ构象变化造成的。 |
| 关 键 词： | 雌激素 雌激素受体β 磷酸化 点突变 |
Construction and Activity Detection of Potent Phosphorylation Sites Mutants of Estrogen Receptor p |
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| ZHOU Yan,DING Li-Hua,CHENG Long,YOU Song,YE Qi-Nong.Construction and Activity Detection of Potent Phosphorylation Sites Mutants of Estrogen Receptor p[J].Letters in Biotechnology,2008,19(5):670-672. | |
| Authors: | ZHOU Yan DING Li-Hua CHENG Long YOU Song YE Qi-Nong |
| Institution: | ZHOU Yan, DING Li-Hua, CHENG Long, YOU Song, YE Qi-Nong (1.Beijing Institute of Biotechnology, Beijing 100850; 2. Shenyang Pharmaceutical University, Shenyang 110016; China) |
| Abstract: | |
| Keywords: | estrogen estrogen receptor β phosphorylation point mutant |
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