Vasorin蛋白特异单链DNA适配体的筛选与鉴定 |
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引用本文: | 李慧,王玮,丁红梅,董洁,黄皑雪,罗昭锋,李洁,白琛俊,李少华,邵宁生.Vasorin蛋白特异单链DNA适配体的筛选与鉴定[J].生物技术通讯,2018(4). |
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作者姓名: | 李慧 王玮 丁红梅 董洁 黄皑雪 罗昭锋 李洁 白琛俊 李少华 邵宁生 |
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作者单位: | 军事科学院军事医学研究院军事认知与脑科学研究所;中国人民武装警察部队后勤学院生物化学与分子生物学教研室;中国科学技术大学 |
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摘 要: | 目的:筛选能特异识别vasorin(VASN)蛋白的单链DNA(ss DNA)适配体并对其进行鉴定。方法:利用SPRSELEX技术筛选VASN蛋白特异ss DNA适配体,通过基因克隆测序、MEME在线软件和RNA structure软件分析富集文库序列并挑选出候选适配体序列,利用EMSA、ELISA、流式细胞术对候选适配体进行特异性与亲和力鉴定。结果:经过5轮SELEX筛选,获得了与VASN蛋白特异结合的ss DNA适配体富集文库,合成候选适配体,经EMSA和ELISA检测分析,证实适配体V4-2能与VASN蛋白特异结合,而不与无关对照牛血清白蛋白结合,其平衡解离常数为281.3±103.7 nmol/L;流式细胞术证实V4-2能够特异识别高表达VASN蛋白的Hep G2细胞。结论:筛选获得特异识别VASN蛋白的ss DNA适配体V4-2。
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