布鲁菌104M∶Omp19过表达株的构建与免疫保护性评价 |
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引用本文: | 杨巧玲,宰晓东,殷瑛,李汭桦,钱梦樱,赵陶然,李耀辉,付玲,徐俊杰.布鲁菌104M∶Omp19过表达株的构建与免疫保护性评价[J].生物技术通讯,2018(1). |
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作者姓名: | 杨巧玲 宰晓东 殷瑛 李汭桦 钱梦樱 赵陶然 李耀辉 付玲 徐俊杰 |
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作者单位: | 军事科学院军事医学研究院生物工程研究所; |
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摘 要: | 目的:利用表达载体p NSGro E2His构建104M∶Omp19过表达株,以增强现有布鲁菌疫苗104M株免疫保护效果。方法:以布鲁菌疫苗104M株基因组为模板,通过PCR扩增得到Omp19基因;将经过Bam HⅠ和XbaⅠ双酶切的Omp19基因连接到经同样双酶切处理的p NSGro E2His载体上,构建Omp19-p NSGro E2His过表达质粒;将构建的过表达质粒转化布鲁菌104M株感受态细胞,利用氯霉素抗性筛选构建成功的104M∶Omp19过表达株;通过皮下免疫BALB/c小鼠,从激发的抗体水平、细胞因子水平以及对抗布鲁菌A19株攻毒后的保护作用等方面评价104M∶Omp19过表达株的免疫保护效力。结果:PCR及Western印迹验证表明获得了104M∶Omp19过表达突变株;免疫评价实验显示104M∶Omp19在抗体水平、细胞因子水平与攻毒保护性方面均优于104M,低剂量免疫即可达到较好的保护效果。结论:布鲁菌疫苗104M株过表达Omp19抗原后,免疫保护效果显著增强,可作为一种新的布鲁菌疫苗候选菌株进行后续研究。
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