基于免疫共沉淀-液质联用技术的新型孕烷X受体配体检测方法的建立 |
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引用本文: | 赵爽,姜棋予,孙慧伟,柴燕涛,李晓娟,王志杰,侯俊,赵敏.基于免疫共沉淀-液质联用技术的新型孕烷X受体配体检测方法的建立[J].生物技术通讯,2018(3). |
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作者姓名: | 赵爽 姜棋予 孙慧伟 柴燕涛 李晓娟 王志杰 侯俊 赵敏 |
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作者单位: | 北京大学三〇二临床医学院;解放军第三〇二医院临床研究管理中心 |
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摘 要: | 目的:建立基于免疫共沉淀-液质联用技术的新型孕烷X受体(PXR)配体检测方法。方法:在HEK293细胞中转染带有Flag标签的PXR表达载体,裂解细胞后用偶联Flag抗体的微珠(beads)结合并分离细胞中表达的FlagPXR蛋白;以PXR的已知最为公认的配体/激动剂利福平为模型药物,配制1μmol/L利福平溶液,与结合有Flag-PXR蛋白的微珠孵育形成微珠-蛋白-利福平复合物;将微珠从体系中分离出来,用蛋白印迹实验检测复合物中的蛋白质,用液相色谱-质谱联用技术(液质联用技术)检测复合物中的利福平。在此基础上对利福平的作用进行验证,在肝细胞癌细胞Hep G2中检测系列浓度梯度的利福平对PXR转录因子活性的影响。结果:用免疫共沉淀技术从HEK293细胞中分离鉴定得到Flag-PXR蛋白;用液质联用技术检测到蛋白与小分子复合物中的利福平;利福平能够剂量依赖地诱导PXR的转录因子活性。结论:建立了基于免疫共沉淀-液质联用技术的新型PXR配体检测方法。
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