| 利用合成的基因回路实现细胞水平上尿酸稳态控制的实验研究 |
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| 引用本文： | 曲国龙,;邵妤,;谭俊杰,;陈章,;金晶,;凌焱,;李玉霞,;刘刚,;陈惠鹏.利用合成的基因回路实现细胞水平上尿酸稳态控制的实验研究[J].生物技术通讯,2014(4):460-466. |
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| 作者姓名： | 曲国龙 ;邵妤 ;谭俊杰 ;陈章 ;金晶 ;凌焱 ;李玉霞 ;刘刚 ;陈惠鹏 |
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| 作者单位： | [1]军事医学科学院生物工程研究所,北京100071; [2]安徽大学生命科学学院,安徽合肥230039; [3]成都军区总医院呼吸科,四川成都610083; [4]沈阳药科大学,辽宁沈阳110016 |
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| 摘 要： | 目的:利用合成生物学方法构建尿酸介导的基因回路,在细胞水平上研究回路对尿酸稳态的调控作用。方法:以耐辐射异常球菌R1基因组中转录抑制物基因hucR及其结合位点基因hucO为基础,化学合成具有转录抑制功能的基因mUTs及其结合位点的8串联结构hucO8,构建基因回路;转染HeLa细胞,通过检测分泌型碱性磷酸酶(SEAP)的表达量来验证回路的作用原理和对尿酸的感应作用;在此基础上,用优化的黄曲霉菌尿酸氧化酶(Uox)基因smUox替换SEAP基因,转染HeLa细胞,通过检测转染前后培养基中尿酸浓度的变化,验证回路对尿酸的调节作用。结果:分别构建了优化的转录抑制物表达载体pcDNA3.1/V5-mUTs、报告基因表达载体pSEAP-hucO8、优化的黄曲霉菌Uox表达载体phucO8-smUox、pBudCE4.1-smUox,双向共表达载体pBudCE4.1-SEAP-mUTs、pBudCE4.1-mUTs-smUox;单独转染pBudCE4.1-SEAP-mUTs或共转染pSEAP-hucO8和pcDNA3.1/V5-mUTs,通过检测培养基中SEAP的表达量,证明双载体及单载体回路对尿酸的感应作用;用smUox替换SAEP基因后,通过检测转染48 h后培养基中尿酸含量的变化,证明双载体及单载体基因回路均具有一定的尿酸调节能力。结论:在细胞水平上,构建的双载体基因回路(phucO8-smUox、pcDNA3.1/V5-mUTs)和单载体基因回路(pBudCE4.1-mUTs-smUox)均可实现对尿酸的感应及调控作用,在一定范围内通过增加mUTs与hucO8的摩尔比,可以改变回路对尿酸的调控范围及调节程度。
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| 关 键 词： | 合成生物学 基因回路 尿酸 稳态控制 共表达 |
Research on Control of Uric Acid Homeostasis at Cellular Level by a Synthetic Gene Circuit |
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| Institution: | QU Guo-Long,SHAO Yu,TAN Jun-Jie,CHEN Zhang,JIN Jing,LING Yan,LI Yu-Xia,LIU Gang,CHEN Hui-Peng (1. Beijing Institute of Biotechnology, Beijing 100071; 2. College of Life Science, Anhui University, Hefei 230039; 3. General Hospital of Chengdu Military Region, Chengdu 610083; g. Shenyang Pharmaceutical University, Shenyang 110016; China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | synthetic biology genetic circuit uric acid homeostatic control co-expression |
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