| 人激活转录因子5基因真核表达载体的构建及其生物学功能研究简 |
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| 引用本文： | 符静,徐小洁,刘家宏,田沛荣,范忠义,吕朝晖,王涛,朱建华,陆菊明,叶棋浓.人激活转录因子5基因真核表达载体的构建及其生物学功能研究简[J].生物技术通讯,2014(1):13-16. |
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| 作者姓名： | 符静 徐小洁 刘家宏 田沛荣 范忠义 吕朝晖 王涛 朱建华 陆菊明 叶棋浓 |
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| 作者单位： | [1]军事医学科学院生物工程研究所,北京100850 [2]解放军总医院内分泌科,北京100853 [3]解放军总医院第一附属医院,北京100039 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金（31100604,30872939,81101065） |
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| 摘 要： | 目的：构建带myc标签的人激活转录因子5（ATF5）的真核表达载体，获得myc-ATF5融合蛋白，并对其生物学功能进行初步检测。方法：以本实验室保存的带有XL5标签的ATF5质粒为模板，采用PCR技术扩增ATF5编码序列，将其插入pXJ-40-myc载体中，Western印迹检测其表达；将重组质粒与空载体分别转染人胚肾293T细胞，通过Western印迹和qRT-PCR检测其下游基因哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）在蛋白和mRNA水平的变化。结果：双酶切和测序结果表明myc-ATF5真核表达质粒构建成功，转染293T细胞后获得表达；Western印迹和qRT-PCR证明myc-ATF5可升高roTOR的转录和蛋白水平。结论：构建了带myc标签的人ATF5真核表达载体，为进一步研究ATF5在自噬中的功能奠定了基础。
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| 关 键 词： | 人激活转录因子5 真核表达 生物学功能 |
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