| 摘 要： | 目的:获得全人源抗人OX40特异性抗体候选株,为相关药物开发奠定基础。方法:依托本实验室构建的大容量全合成全人源噬菌体单链抗体库平台,以OX40为抗原进行固相筛选,经过3轮条件渐进严苛的筛选后,阳性克隆得到富集;将其中富集效果最好的一株单链抗体scFv-1改造成全抗体(Ig G1)形式,改造成功的重组质粒按照一定比例转染HEK293-F细胞进行抗体的瞬时表达;基于AKTA系统对全抗体进行纯化,将纯化得到的全抗体重命名为OX40mab-1。通过ELISA、间接免疫荧光、流式细胞术等试验分别验证OX40mab-1与抗原的结合活性、特异性、血清稳定性;通过BIAcore 3000初步测定抗体亲和力。结果:3轮筛选后得到1株富集率达95%的单链抗体,改造成全抗体形式后,与抗原OX40的结合EC50为0.015μmol/L;该抗体与其他无关抗原均不结合,特异性良好;37℃血清放置15 d后,与抗原依具有较好的结合活性,血清稳定性良好;经BIAcore 3000初步测定该抗体亲和力为251 nmol/L。结论:获得1株理化性质良好、特异性较好的抗OX40全人源单克隆抗体OX40mab-1,具有继续开发价值。
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