| 稳定表达猪APOBEC3F的PK15细胞单克隆株的建立 |
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| 引用本文： | 贾俊婷,袁典,汪琳,马玉媛,章金刚.稳定表达猪APOBEC3F的PK15细胞单克隆株的建立[J].生物技术通讯,2019(1):31-35,72. |
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| 作者姓名： | 贾俊婷 袁典 汪琳 马玉媛 章金刚 |
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| 作者单位： | 军事科学院军事医学研究院卫生勤务与血液研究所;新乡学院 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(31502060) |
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| 摘 要： | 目的:利用慢病毒载体建立稳定表达猪载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样蛋白3F(pAPOBEC3F,简称pA3F)的PK15细胞系。方法:以实验室前期构建的pBPLV-flag-pA3F质粒为模板,PCR扩增pA3F基因,克隆到pLenti-Puro-3Flag载体构建成pLenti-Puro-pA3F-3Flag质粒,Western印迹鉴定其在HEK293T细胞中的表达;将pLenti-Puro-pA3F-3Flag质粒与包装载体共转染HEK293T细胞,包装成Lenti-pA3F慢病毒并测定病毒滴度;将Lenti-pA3F慢病毒感染PK15细胞,通过嘌呤霉素压力筛选并结合有限稀释法,筛选稳定表达pA3F的细胞单克隆株,最终Western印迹检测细胞单克隆株中pA3F的表达。结果:菌落PCR和序列测定表明pLenti-Puro-pA3F-3Flag质粒构建正确,Western印迹显示该质粒可在HEK293T细胞中表达pA3F蛋白;包装了Lenti-pA3F慢病毒,滴度为1.32×10~8TU/mL,慢病毒感染PK15细胞后可检测到pA3F蛋白的表达;经Western印迹鉴定,筛选得到的单克隆细胞可稳定表达pA3F蛋白。结论:建立了稳定表达pA3F的PK15细胞单克隆株,为进一步深入研究猪内源性反转录病毒在pA3F作用下的免疫逃逸机制奠定了基础。
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| 关 键 词： | 猪载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样蛋白3F 慢病毒载体 猪内源性反转录病毒 |
Generation of a Stable PK15 Monoclonal Cell Line Expressing Pig APOBEC3F |
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| JIA Jun-Ting,YUAN Dian,WANG Lin,MA Yu-Yuan,ZHANG Jin-Gang.Generation of a Stable PK15 Monoclonal Cell Line Expressing Pig APOBEC3F[J].Letters in Biotechnology,2019(1):31-35,72. |
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| Authors: | JIA Jun-Ting YUAN Dian WANG Lin MA Yu-Yuan ZHANG Jin-Gang |
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| Institution: | (Institute of Health Service and Transfusion Medicine,Academy of Military Medical Sciences,Beijing 100850;Xinxiang University,Xinxiang 453000,China) |
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| Abstract: | JIA Jun-Ting;YUAN Dian;WANG Lin;MA Yu-Yuan;ZHANG Jin-Gang(Institute of Health Service and Transfusion Medicine,Academy of Military Medical Sciences,Beijing 100850;Xinxiang University,Xinxiang 453000,China) |
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| Keywords: | pig apolipoprotein B mRNA-editing enzyme catalytic polypeptide-like 3F lentivirus vector porcine endogenous retrovirus |
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