| HIV-1 tat基因改造及其蛋白表达、纯化与抗体制备 |
| |
| 引用本文： | 齐香荣,张相民,高瑛瑛,邓瑶,闫克夏,李仁清,阮力.HIV-1 tat基因改造及其蛋白表达、纯化与抗体制备[J].生物技术通讯,2006,17(2):142-145. |
| |
| 作者姓名： | 齐香荣 张相民 高瑛瑛 邓瑶 闫克夏 李仁清 阮力 |
| |
| 作者单位： | 中国疾病预防控制中心,病毒病预防控制所,北京,100052 |
| |
| 基金项目： | 中国综合性国际艾滋病研究项目(CIPRA)(1U19A15191501)，国家高技术研究发展计划项目(2003AA219080) |
| |
| 摘 要： | 目的:为了方便实验室工作中HIV-1B'/C亚型及C亚型Tat蛋白的检测,制备了相应的Tat蛋白及其抗体。方法:将我国HIV-1B'/C亚型流行株tat基因的第1个外显子和HIV-1C亚型tat基因的第2个外显子融合在一起,将密码子替换为大肠杆菌的优势密码子,通过合成引物、PCR拼接的方法,获得目的基因序列;在原核系统中与pET32a 载体中的His·Tag、Trx·Tag及S·Tag进行融合表达;目的蛋白经Ni 金属螯合层析柱纯化后,用于免疫家兔,制备多克隆抗体。结果:PCR拼接获得306bp的目的基因序列;在原核系统中融合表达得到相对分子质量约31000的融合蛋白,占菌体总蛋白的21%。纯化后的融合蛋白免疫家兔,制备了多克隆抗体,Western印迹结果显示,获得的多克隆抗体与HIV-1B'/C亚型的Tat蛋白反应良好;间接免疫荧光结果表明,获得的多克隆抗体与HIV-1B'/C亚型和C亚型的Tat蛋白都能产生特异性反应。结论:制备的多克隆抗体能够使用间接免疫荧光方法检测HIV-1C亚型的Tat蛋白,使用Western印迹方法和间接免疫荧光方法都能检测HIV-1B'/C亚型的Tat蛋白。
|
| 关 键 词： | HIV-1 tat基因 Tat蛋白 原核表达 多克隆抗体 |
| 文章编号： | 1009-0002（2006）02-0142-04 |
| 收稿时间： | 2006-02-16 |
| 修稿时间： | 2006年2月16日 |
Expression, Purification and Antibody Preparation of a Gene Reconstructed HIV-1 Tat Protein |
| |
| QI Xiang-rong,ZHANG Xiang-min,GAO Ying-ying,DENG Yao,YAN Ke-xia,LI Ren-qing,RUAN Li.Expression, Purification and Antibody Preparation of a Gene Reconstructed HIV-1 Tat Protein[J].Letters in Biotechnology,2006,17(2):142-145. |
| |
| Authors: | QI Xiang-rong ZHANG Xiang-min GAO Ying-ying DENG Yao YAN Ke-xia LI Ren-qing RUAN Li |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | HIV-1 |
| 本文献已被 CNKI 万方数据 等数据库收录！ |
|
