| 抗siRNA的GFP-Plk1同义突变表达载体及其稳定细胞系的构建 |
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| 引用本文： | 李伟,李峰生,于楠,刘萱,李平,江其生,曹诚.抗siRNA的GFP-Plk1同义突变表达载体及其稳定细胞系的构建[J].生物技术通讯,2015(2):207-210. |
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| 作者姓名： | 李伟 李峰生 于楠 刘萱 李平 江其生 曹诚 |
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| 作者单位： | 军事医学科学院生物工程研究所;第二炮兵总医院核与辐射损伤实验室 |
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| 摘 要： | 目的:构建GFP-Plk1同义突变表达载体及其稳定转染细胞系。方法:设计Polo样激酶1(Plk1)si RNA序列及相对应的同义突变引物,并利用二次PCR方法扩增Plk1基因,定向克隆到p Rex-EGFP-IRES-Hygro载体中,构建p Rex-EGFP-r Plk1-IRES-Hygro表达载体;利用逆转录病毒感染的方法,构建He La/GFP-r Plk1稳定细胞系;利用免疫印迹及激光共聚焦显微镜,验证Plk1 si RNA的干扰效果及稳定细胞系的构建。结果:双酶切鉴定和测序结果表明构建的p Rex-EGFP-r Plk1-IRES-Hygro正确;免疫印迹实验证明Plk1 si RNA序列可以有效抑制He La/GFP-r Plk1细胞中内源性Plk1蛋白的表达,但不能干扰掉外源GFP-r Plk1蛋白;在荧光共聚焦显微镜下,观察到有丝分裂的前中期和末期,GFP-r Plk1分别定位于着丝粒和中间体上。结论:构建了Plk1同义突变表达载体p Rex-EGFP-r Plk1-IRES-Hygro和He La/GFP-r Plk1稳定细胞系,为下一步研究Plk1在有丝分裂期的调控机制提供了模型。
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| 关 键 词： | Plk1 抗siRNA 同义突变 稳定细胞系 |
Construction of Synonymous Mutated GFP-Plk1 Expression Vector with Resistance to siRNA and Stably Transfected Cells |
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| LI Wei;LI Feng-Sheng;YU Nan;LIU Xuan;LI Ping;JIANG Qi-Sheng;CAO Cheng.Construction of Synonymous Mutated GFP-Plk1 Expression Vector with Resistance to siRNA and Stably Transfected Cells[J].Letters in Biotechnology,2015(2):207-210. |
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| Authors: | LI Wei;LI Feng-Sheng;YU Nan;LIU Xuan;LI Ping;JIANG Qi-Sheng;CAO Cheng |
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| Institution: | LI Wei;LI Feng-Sheng;YU Nan;LIU Xuan;LI Ping;JIANG Qi-Sheng;CAO Cheng;Beijing Institute of Biotechnology;Laboratory of Nuclear and Radiation Damage, General Hospital of the Second Artillery; |
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