| 短发夹RNA慢病毒载体稳定抑制NLRP3表达的HepG2细胞的构建 |
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| 引用本文： | 孙晓雅,韩庆旺,宋晓艳,何文俊,郝好杰,韩为东,母义明.短发夹RNA慢病毒载体稳定抑制NLRP3表达的HepG2细胞的构建[J].生物技术通讯,2015(2):174-177,277. |
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| 作者姓名： | 孙晓雅 韩庆旺 宋晓艳 何文俊 郝好杰 韩为东 母义明 |
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| 作者单位： | 解放军总医院内分泌科;解放军总医院基础医学所分子生物室 |
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| 基金项目： | 国家高技术研究发展计划(2013AA020105) |
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| 摘 要： | 目的:构建针对NLRP3基因的短发夹RNA(sh RNA)慢病毒表达载体,在Hep G2细胞中鉴定该载体对NLRP3的抑制效果。方法:设计针对NLRP3基因的sh RNA序列,将其插入慢病毒表达载体p WPT-U6-sh RNA-CMV-GFP中,将载体与包装质粒ps PAX2、p MD2.G共转染293T细胞,进行病毒包装;得到的病毒原液浓缩后系列稀释为9个浓度递减的病毒液,分别转染293T细胞后进行滴度测定;用获得的慢病毒液感染人肝癌细胞系Hep G2,获得稳定沉默NLRP3的细胞株;利用实时定量PCR和Western印迹检测稳定细胞株中NLRP3的沉默效应。结果:构建了具有沉默效应的慢病毒干扰载体;稀释法测定干扰病毒滴度为2×108TU/m L;实时定量PCR和Western印迹实验均证实慢病毒转染后,细胞株中NLRP3表达水平明显降低。结论:构建了人NLRP3基因特异性慢病毒干扰载体,获得NLRP3基因稳定干扰的Hep G2细胞株。
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| 关 键 词： | NLRP3 短发卡RNA 慢病毒载体 Hep G2细胞 |
Construction of Recombinant HepG2 Cells with shRNA Lentiviral Vector Targeting NLRP3 |
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| SUN Xiao-Ya;HAN Qing-Wang;SONG Xiao-Yan;HE Wen-Jun;HAO Hao-Jie;HAN Wei-Dong;MU Yi-Ming.Construction of Recombinant HepG2 Cells with shRNA Lentiviral Vector Targeting NLRP3[J].Letters in Biotechnology,2015(2):174-177,277. |
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| Authors: | SUN Xiao-Ya;HAN Qing-Wang;SONG Xiao-Yan;HE Wen-Jun;HAO Hao-Jie;HAN Wei-Dong;MU Yi-Ming |
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| Institution: | SUN Xiao-Ya;HAN Qing-Wang;SONG Xiao-Yan;HE Wen-Jun;HAO Hao-Jie;HAN Wei-Dong;MU Yi-Ming;Department of Endocrinology, Chinese PLA General Hospital;Department of Molecular Biology, Institute of Basic Medicine;Chinese PLA General Hospital; |
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