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大鼠胰岛分离、培养条件的优化及miR-126表达的检测方法比较
引用本文:王玉琢,袁文俊,米志强,安小平,童贻刚.大鼠胰岛分离、培养条件的优化及miR-126表达的检测方法比较[J].生物技术通讯,2015(1):102-106.
作者姓名:王玉琢  袁文俊  米志强  安小平  童贻刚
作者单位:宁夏医科大学基础医学院;第二军医大学;军事医学科学院微生物流行病研究所
基金项目:国家自然科学基金(81270880)
摘    要:目的:优化SD大鼠胰岛细胞的分离、纯化和培养方法与条件,为研究miR-126在Ⅱ型糖尿病中的作用机制提供活性与功能良好的胰岛细胞及miR-126表达的检测方法。方法:水合氯醛腹腔注射麻醉SD大鼠,采用8 mL胶原酶Ⅴ(含DNaseⅠ100 U)逆行注射、原位消化后Hitopaque-1077梯度离心分离纯化SD大鼠胰岛细胞,从培养后的胰岛细胞中提取总RNA,分别用加尾法和茎环法进行miR-126的反转录,实时定量PCR(qPCR)检测miR-126的表达量。结果:用该方法可从每只SD大鼠中分离、纯化得到胰岛细胞372±45个,胰岛细胞纯度90%,胰岛细胞存活率95%;用加尾法和茎环法qPCR检测miR-126的Cp值分别为34.56±2.56和32.47±2.01。结论:胶原酶Ⅴ(含DNaseⅠ100 U)逆行注射、原位消化可有效避免因消化时胶状物质的产生而导致的胰岛细胞分离失败,Hitopque-1077梯度离心分离方法具有操作简单、便捷、成功率高等特点,可得到活性与功能较好的胰岛细胞;与加尾法相比,茎环法能够更灵敏地检测胰岛细胞miR-126的表达量。

关 键 词:胰岛细胞  分离  培养  miR-126  实时定量PCR

Optimization of SD Rat Islet Cell Isolation,Culturing and the Comparison of Methods Detecting miR-126
WANG Yu-Zhuo;YUAN Wen-Jun;MI Zhi-Qiang;AN Xiao-Ping;TONG Yi-Gang.Optimization of SD Rat Islet Cell Isolation,Culturing and the Comparison of Methods Detecting miR-126[J].Letters in Biotechnology,2015(1):102-106.
Authors:WANG Yu-Zhuo;YUAN Wen-Jun;MI Zhi-Qiang;AN Xiao-Ping;TONG Yi-Gang
Institution:WANG Yu-Zhuo;YUAN Wen-Jun;MI Zhi-Qiang;AN Xiao-Ping;TONG Yi-Gang;Ningxia Medical University;Second Military Medical University;Beijing Institute of Microbiology and Epidemiology;
Abstract:
Keywords:
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