| 鼠源E型肉毒毒素免疫噬菌体单链抗体库的构建及筛选 |
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| 引用本文： | 秦海艳,王建锋,熊颖,卢卫嘉,张超,毛晓燕.鼠源E型肉毒毒素免疫噬菌体单链抗体库的构建及筛选[J].生物技术通讯,2015(1):59-63,67. |
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| 作者姓名： | 秦海艳 王建锋 熊颖 卢卫嘉 张超 毛晓燕 |
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| 作者单位： | 兰州生物制品研究所有限责任公司 |
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| 摘 要： | 目的:构建鼠源E型肉毒毒素(BoNT/E)免疫噬菌体单链抗体库,筛选BoNT/E特异性抗体。方法:从E型肉毒类毒素免疫小鼠的脾细胞中提取总RNA,反转录成cDNA,分别扩增出小鼠重链可变区基因和轻链可变区基因;通过重叠延伸PCR将重链可变区基因和轻链可变区基因组装成scFv基因,重组于噬粒pS100中,电转化大肠杆菌TG_1,合并所有克隆成初级库;随机挑取克隆进行核苷酸序列测定,对初级库序列多样性进行分析;在辅助噬菌体M_(13)K_(07)的拯救下,构建成scFv噬菌体抗体库;用纯化的BoNT/E对鼠源BoNT/E免疫噬菌体单链抗体库进行3轮富集筛选,制备单克隆的噬菌体抗体颗粒进行酶联免疫吸附试验,阳性克隆进行核苷酸序列测定。结果:鼠源BoNT/E免疫噬菌体单链抗体库的库容为7.09×10~7,随机挑取的20个克隆序列各不相同,序列正确率为85%,基本覆盖了IgHV、IgKV、IgLV的优势家族;纯化的BoNT/E作为抗原通过3轮筛选,噬菌体抗体富集了66倍,第3轮筛选后随机挑取90个克隆制备噬菌体抗体颗粒,酶联免疫吸附试验分析有88个呈现阳性反应,序列比对得到了24个不同序列的BoNT/E特异性抗体。结论:构建了库容量达7.09×10~7的鼠源BoNT/E免疫噬菌体单链抗体库,筛选得到了24个不同序列的BoNT/E特异性抗体。
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| 关 键 词： | 噬菌体展示 E型肉毒毒素 抗体库 单链抗体 |
Construction and Screening of Murine BoNT/E Immunized Single Chain Antibody Phage Display Library |
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| QIN Hai-Yan;WANG Jian-Feng;XIONG Ying;LU Wei-Jia;ZHANG Chao;MAO Xiao-Yan.Construction and Screening of Murine BoNT/E Immunized Single Chain Antibody Phage Display Library[J].Letters in Biotechnology,2015(1):59-63,67. |
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| Authors: | QIN Hai-Yan;WANG Jian-Feng;XIONG Ying;LU Wei-Jia;ZHANG Chao;MAO Xiao-Yan |
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| Institution: | QIN Hai-Yan;WANG Jian-Feng;XIONG Ying;LU Wei-Jia;ZHANG Chao;MAO Xiao-Yan;Lanzhou Institute of Biological Products Co.Ltd.; |
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