| 基于GST-pull down的小G蛋白Racl活性检测体系的建立 |
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| 引用本文： | 甄诚,陈亮,柏兆方,王芋艺,满江红.基于GST-pull down的小G蛋白Racl活性检测体系的建立[J].生物技术通讯,2011,22(4). |
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| 作者姓名： | 甄诚 陈亮 柏兆方 王芋艺 满江红 |
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| 作者单位： | 国家生物医学分析中心,北京,100850 |
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| 摘 要： | 目的:根据人PA KI基因的p21结合结构域(PBD)能够特异结合GTP-Rac 1的特性,构建GST-PBD原核表达质粒,并利用CST-pull down方法检测真核细胞内小G蛋白RacI的活性.方法:将人PAK1基因的PBD结构域克隆到pGEX原核表达载体上,经诱导纯化得到GST-PBD融合蛋白,并通过GST-pull down实验评枯该方法的特异性和准确性.结果:pGEX-PBD质粒构建成功;纯化得到的GST-PBD融合蛋白能够特异性地与激活形式的Rac1(GTP-Rac1)结合,并且能够准确反映血小板衍生生长因子刺激下细胞内Rac1的激活过程.结论:GST-PBD融合蛋白及其整套CST-pull down检测体系能方便有效地检测细胞内Rael的活性.
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| 关 键 词： | 小G蛋白 |
Construction of Small G Protein Racl Activity Analysis System Based on GST-Pull Down |
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| MEN Cheng,CHEN Liang,BAI Zhao-Fang,WANG Qian-Yi,MAN Jiang-Hong.Construction of Small G Protein Racl Activity Analysis System Based on GST-Pull Down[J].Letters in Biotechnology,2011,22(4). |
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| Authors: | MEN Cheng CHEN Liang BAI Zhao-Fang WANG Qian-Yi MAN Jiang-Hong |
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| Keywords: | Rac1 GST-pull down |
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