| 逆转录病毒介导的小干扰RNA稳定抑制子LRP16基因表达 |
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| 引用本文： | 韩为东,李琦,赵亚力,母义明,李雪,宋海静,郝好杰.逆转录病毒介导的小干扰RNA稳定抑制子LRP16基因表达[J].生物技术通讯,2004,15(4):326-329. |
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| 作者姓名： | 韩为东 李琦 赵亚力 母义明 李雪 宋海静 郝好杰 |
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| 作者单位： | 1. 解放军总医院,基础医学研究所分子生物室,北京,100853
2. 解放军总医院,内分泌科,北京,100853 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(30200095);北京市自然科学基金(7042059) |
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| 摘 要： | RNA干涉是近年被广泛关注的一项技术,通过19～21 nt的双链核酸介导使靶基因mRNA特异降解,目前已被广泛应用于细胞水平的基因功能研究.通过沉默LRP16基因表达介绍一项利用逆转录病毒介导发夹环样小干扰RNA的策略.首先选择了LRP16基因mRNA翻译起始位点下游+374 nt和+668 nt位置分别作为小干扰RNA作用靶位点,通过设计21nt的反义序列,构建了pL374和pL668 2个以pLPC为骨架的逆转录病毒载体,针对绿色荧光蛋白序列构建pGFPi载体做阴性对照,茎环样结构小RNA由U6启动子驱动转录生成.3个载体分别与VSVG共转染293GP2细胞,包装假病毒,再分别感染MCF-7细胞,嘌呤霉素筛选获得稳定生成小干扰RNA的细胞.Northern blot实验表明pL374和pL668可分别将LRP16基因抑制90%和60%,为进一步研究LRP16基因功能奠定了基础.另外,首次将mU6启动子序列插入pLPC逆转录病毒载体骨架,将其改造为可介导发夹环样小干扰RNA产生的质粒载体.
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| 关 键 词： | LRP16基因 逆转录病毒 小干扰RNA MCF-7细胞 |
| 文章编号： | 1009-0002(2004)04-0326-04 |
| 修稿时间： | 2004年2月10日 |
Stable suppression of LRP16 gene expression by retrovirus-mediated RNA interference |
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