| 人Fas N端融合蛋白的原核表达、纯化及初步分析 |
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| 引用本文： | 季韶洋,张祥雪.人Fas N端融合蛋白的原核表达、纯化及初步分析[J].生物技术通讯,2008,19(4). |
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| 作者姓名： | 季韶洋 张祥雪 |
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| 作者单位： | 北京林业大学,理学院,北京,100083 |
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| 摘 要： | 目的：对Fas蛋白N端的30～108位肽段进行原核表达,制备可溶性蛋白,并完成二级结构分析。方法：利用BLAST程序进行同源性分析,确定所要构建的FasN端半胱氨酸富集结构域（CRD）,PCR扩增目的基因片段,将其克隆入表达载体pGEX-6P-1,并转化大肠杆菌BL21（DE3）,于16℃用0.2mmol/L的IPTG诱导25h表达GST-Fas融合蛋白;用Glu-tathione Sepharose 4B柱分离GST-Fas融合蛋白,用PreScission蛋白酶切去GST标签,将洗脱的蛋白样品经Superdex 75凝胶预装柱进一步纯化;对所获得的可溶性、高纯度蛋白进行圆二色谱分析。结果与结论：获得重组质粒pGEX-6P-1-fas,并在大肠杆菌中可溶性表达了FasN端CRD功能结构域蛋白;经亲和层析、酶切、分子筛层析后,获得了可溶的、高纯度的FasN端CRD功能结构域蛋白;圆二色谱结果揭示目标蛋白富含β-折叠,为进一步研究Fas的结构和功能奠定了基础。
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| 关 键 词： | Fas 原核表达 蛋白质纯化 圆二色谱 |
Prokaryotic Expression, Purification and Primary Bio-Chemical Properties Research for Fas N-Terminal Protein of Homo sapiens |
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| JI Shao-Yang,ZHANG Xiang-Xue.Prokaryotic Expression, Purification and Primary Bio-Chemical Properties Research for Fas N-Terminal Protein of Homo sapiens[J].Letters in Biotechnology,2008,19(4). |
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| Authors: | JI Shao-Yang ZHANG Xiang-Xue |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Fas |
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