2个表达单元间相互位置和转录方向对表达的影响 |
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引用本文: | 安怀杰,俞炜源,孙志伟.2个表达单元间相互位置和转录方向对表达的影响[J].生物技术通讯,2007,18(3):377-380. |
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作者姓名: | 安怀杰 俞炜源 孙志伟 |
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作者单位: | 军事医学科学院,生物工程研究所,北京,100071 |
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基金项目: | 国家高技术研究发展计划(863计划) |
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摘 要: | 目的:研究质粒表达载体中2个表达单元间相互位置和转录方向关系对表达的影响,找出利于2个表达单元表达的优化的相互关系。方法:以全抗体为研究对象,构建了轻重链方向不同的2种相互关系的单质粒表达载体pIRESdhfrA和pIRESdhfrB,转染CHO-dhfr-细胞后,对瞬时表达水平进行了比较。以pIRESdhfrA和pIRESdhfrB为基础,构建了瞬时表达载体pIRESdhfrA-sv40ori和pIRESdhfrB-sv40ori,在COS-7细胞中进行了瞬时表达水平的比较。构建了基于CHO定点细胞系的稳定表达细胞株,对pIRESdhfrA和pIRESdhfrB进行稳定表达水平的比较。结果:在CHO-dhfr-的瞬时表达水平比较中,pIRESdhfrB转染的细胞表达水平是pIRESdhfrA转染细胞的2.18倍。与pIRESdhfrA-sv40ori在COS-7细胞的瞬时表达水平相比,pIRESdhfrB-sv40ori是其表达水平的2.3倍。pIRESdhfrB-FRT构建的CHO定点细胞平均表达水平是pIRESdhfrA-FRT构建的CHO定点细胞的11.6倍。结论:在构建的真核细胞质粒表达载体pIRESdhfr中,2个表达盒的启动子头-头转录方向关系比头-尾方向关系更利于重组蛋白的表达。
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关 键 词: | 表达载体 表达盒 转录方向 |
文章编号: | 1009-0002(2007)03-0377-04 |
收稿时间: | 2007-01-09 |
修稿时间: | 2007年1月9日 |
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