风疹病毒多表位诊断抗原的制备与评价 |
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引用本文: | 苏秋东,郭敏卓,邱丰,贾志远,卢学新,孟庆玲,田瑞光,毕胜利,伊瑶.风疹病毒多表位诊断抗原的制备与评价[J].病毒学报,2016,32(3). |
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作者姓名: | 苏秋东 郭敏卓 邱丰 贾志远 卢学新 孟庆玲 田瑞光 毕胜利 伊瑶 |
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作者单位: | 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所,北京,102206;北京出入境检验检疫技术中心,北京,100026 |
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摘 要: | 原核表达与层析纯化获取风疹病毒(Rubella Virus,RV)多表位诊断抗原,并初步评价其抗原性。将RV衣壳蛋白C aa 3~29、aa 96~123以及包膜糖蛋白E1aa208~247三个主要免疫显性表位串联,密码子优化后全基因合成;利用基因重组技术将多表位串联片段插入带有GST标签的表达质粒中,在大肠杆菌中进行表达,并利用亲和层析和离子交换层析纯化目的蛋白;利用Western Blot(WB)技术对目的蛋白抗原性进行鉴定,并建立RV-IgM抗体检测ELISA技术,初步评价此方法对阴阳血清样本的鉴别能力。获取高度均质的RV多表位诊断抗原,WB实验表明目的蛋白不但可以被anti-GST单克隆抗体识别,还可以被anti-RV多克隆抗体、RV-IgM阳性血清相应抗体所识别。分别对48份RV急性感染病例的阳性血清、阴性血清和健康人血清进行检测,发现一致性优异。原核表达与层析纯化可以获取抗原性良好的RV多表位诊断抗原,偶联HRP后可以作为检测抗原应用于RV-IgM ELISA血清学检测中。
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关 键 词: | 多表位抗原 风疹病毒 原核表达 层析纯化 GST标签 |
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