| 悬浮驯化HEK-293FT细胞表达人乳头瘤病毒16型假病毒及其冷冻电镜结构解析 |
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| 引用本文： | 王大宁,刘亚静,郑清炳,李智海,范飞,柳欣林,宋硕,顾颖,夏宁邵.悬浮驯化HEK-293FT细胞表达人乳头瘤病毒16型假病毒及其冷冻电镜结构解析[J].病毒学报,2016,32(5). |
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| 作者姓名： | 王大宁 刘亚静 郑清炳 李智海 范飞 柳欣林 宋硕 顾颖 夏宁邵 |
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| 作者单位： | 厦门大学公共卫生学院,分子疫苗学和分子诊断学国家重点实验室,厦门361102;厦门大学生命科学学院,国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术中心,厦门361102;厦门大学公共卫生学院,分子疫苗学和分子诊断学国家重点实验室,厦门361102;厦门大学生命科学学院,国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术中心,厦门361102 |
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| 摘 要： | 为了大量获得人乳头瘤病毒(HPV)16型的假病毒颗粒(PsV),将贴壁生长的293FT细胞驯化成为悬浮细胞系进行大规模的悬浮培养,同时优化假病毒纯化方法,并使用冷冻电镜解析其三维空间结构。本研究通过逐步降低培养基中血清浓度和加入抗聚团剂等方法,获得了可在Wave生物反应器中大规模悬浮培养的293FT细胞,经过携有HPV16L1、L2基因和GFP报告基因的质粒转染,实现了大规模制备HPV16假病毒;利用CsCl等密度和蔗糖密度梯度超速离心的方法,获得高纯度的HPV16假病毒颗粒,滴度为8.2×10~5 TCID50/!L;蛋白印迹结果显示HPV16假病毒中含有L1和L2蛋白,定量ELISA测得L1蛋白的含量为156.0μg/mL;最后使用Tecnai G2F30冷冻电镜和Falcon电子直接探测相机采集冷冻HPV16假病毒的图像,应用AUTO3DEM软件解析其结构,结构分辨率为14,呈现为T=7的等二十面体对称结构,直径为600。本研究为HPV疫苗临床血清中和检测、高分辨率HPV16假病毒的结构解析及L1和L2相互作用研究奠定了良好基础。
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| 关 键 词： | 人乳头瘤病毒 假病毒 悬浮培养 冷冻电镜三维结构 |
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