基于滚环扩增的鸭乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA检测方法的建立 |
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引用本文: | 苏何玲,王慧敏,冉敬塬,王知,李红岩,杨易,徐东平,刘永明.基于滚环扩增的鸭乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA检测方法的建立[J].病毒学报,2014(4). |
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作者姓名: | 苏何玲 王慧敏 冉敬塬 王知 李红岩 杨易 徐东平 刘永明 |
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作者单位: | 桂林医学院生物化学与分子生物学教研室; |
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基金项目: | 广西自然科学基金项目2012GXNSFAA053146资助 |
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摘 要: | 滚环扩增(RCA)是新近发展起来的一种能特异性扩增环形DNA的实验技术,自2008年以来被广泛用于HBV基因全长扩增及共价闭合环状DNA(cccDNA)耐药突变分析等研究。为了便于鸭乙型肝炎病毒(DHBV)cccDNA的分析,本研究建立了基于RCA的DHBV cccDNA的检测方法。通过针对DHBV高度保守序列设计的4对RCA硫化修饰引物,以血清DHBV DNA为阴性对照,从肝组织DHBV DNA标本中扩增得到DHBV cccDNA。然后用跨缺口引物扩增RCA产物测序替代限制性内切酶切分析进行DHBV cccDNA鉴定。应用该方法检测39份携带DHBV麻鸭肝组织与血清标本结果显示:全部肝组织标本均检出DHBV cccDNA,而全部血清标本则均无DHBV cccDNA检出,表明本研究建立的基于RCA的DHBV cccDNA检测法具有良好的特异性和灵敏性。该方法的建立为应用鸭乙型肝炎病毒动物模型研究cccDNA在病毒致病机制中的作用以及评价抗病毒疗效奠定了实验基础。
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关 键 词: | 滚环扩增 鸭乙型肝炎病毒 共价闭合环状DNA |
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