| 甲型流感病毒重组血凝素蛋白的真核表达及免疫效力分析 |
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| 引用本文： | 刘京,龚铮,年悬悬,邓涛,周蓉,张国梅,李雪丹,张哲罡,张家友,杨晓明.甲型流感病毒重组血凝素蛋白的真核表达及免疫效力分析[J].病毒学报,2023(1):31-44. |
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| 作者姓名： | 刘京 龚铮 年悬悬 邓涛 周蓉 张国梅 李雪丹 张哲罡 张家友 杨晓明 |
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| 作者单位： | 1. 武汉生物制品研究所病毒性疫苗研究二室;2. 国家联合疫苗工程技术研究中心;3. 中国生物技术股份有限公司 |
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| 基金项目： | 国家重大科学工程建设项目计划（项目号：2016Z09106003-008）,题目：四价流感病毒裂解疫苗的研制； |
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| 摘 要： | 利用真核表达系统稳定表达HA重组蛋白并评价其免疫原性及攻毒保护效果，为重组流感亚单位疫苗的研制提供更多的理论基础。本研究以H1N1型流感病毒HA胞外区域序列为目的基因构建重组质粒KS001-HA并转染至CHO细胞得到表达重组蛋白rHA的单克隆细胞株，通过离子交换层析法纯化rHA。将rHA与佐剂联合免疫小鼠以评估免疫原性，并对免疫后的小鼠进行攻毒，监测小鼠存活率和体重变化，检测其肺组织病毒载量，并分析肺组织的病理变化。重组质粒KS001-HA在CHO细胞中稳定整合并分泌表达rHA蛋白，其相对分子质量约70 kD，经PNGaseF酶处理后，蛋白大小变为60kD。纯化后rHA蛋白纯度>95%。加强免疫后小鼠血清抗体效价显著增强，佐剂配伍免疫效果优于rHA单独免疫，其中HA203佐剂配伍组15、30、60μg剂量组免疫效应显著高于阳性对照组H1N1疫苗原液组。攻毒后HA203佐剂配伍组无小鼠死亡，小鼠体重平均下降率低于10%，肺组织肺泡结构清晰，仅见肺泡壁轻度增厚，伴随少量的炎性细胞浸润，仅检测到少量呈灶性分布的棕黄色颗粒。本研究成功构建了重组质粒KS001-HA，于CHO细胞中表达，并...
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| 关 键 词： | 流感亚单位疫苗 重组蛋白血凝素 免疫原性 |
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