人类肠道病毒68型3A蛋白可溶区的表达及其结构初步研究 |
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引用本文: | 李婷,孔佳,于晓方,韩雪.人类肠道病毒68型3A蛋白可溶区的表达及其结构初步研究[J].病毒学报,2015,31(6). |
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作者姓名: | 李婷 孔佳 于晓方 韩雪 |
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作者单位: | 天津大学生命科学学院,天津,300072;天津大学生命科学学院,天津,300072;天津大学生命科学学院,天津,300072;天津大学生命科学学院,天津,300072 |
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基金项目: | 国家科技重大专项资助项目2013ZX10001-005 |
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摘 要: | 为了解人类肠道病毒68型3A蛋白可溶区的结构,本研究构建了EV-D68 3A蛋白可溶区的原核表达载体,在大肠杆菌中表达、纯化并对其结构进行了初步研究。首先,采用PCR的方法扩增EV-D68 3A(1~61)基因片段,克隆至原核表达载体pET-28a-His-SUMO中,转化进入BL21(DE3)感受态细胞,诱导表达出His-SUMO-3A(1~61)融合蛋白。经Ni-NTA树脂亲和层析初步纯化后得到大量融合蛋白,利用ULP酶酶切去除His-SUMO标签,通过Ni-NTA树脂亲和层析、阴离子交换层析柱、分子筛层析等方法分离标签并进一步纯化目的蛋白。最后通过化学交联反应检测目的蛋白的多聚化状态。结果显示,利用pET28a-His-SUMO-3A(1~61)原核表达载体能够在大肠杆菌中成功表达出大量可溶性的融合蛋白;经过多步纯化方法得到了大量高纯度的目的蛋白,平均每升大肠杆菌可得到约5mg目的蛋白,纯度达95%以上;通过化学交联反应证明了该蛋白的多聚化存在形式。本研究成功建立了EV-D68 3A蛋白可溶区的表达和纯化系统,为进一步获得3A蛋白晶体、研究3A蛋白功能以及设计以3A为靶点的抗病毒药物奠定了基础。
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关 键 词: | 肠道病毒68型 非结构蛋白 3A蛋白 蛋白表达与纯化 交联反应 |
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