| 三重融合PCR法构建感染性辛德毕斯嵌合病毒cDNA克隆 |
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| 引用本文： | 王力华,付士红,唐青,杨益良,梁国栋.三重融合PCR法构建感染性辛德毕斯嵌合病毒cDNA克隆[J].病毒学报,2006,22(2):107-113. |
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| 作者姓名： | 王力华 付士红 唐青 杨益良 梁国栋 |
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| 作者单位： | 中国疾病预防控制中心,病毒病预防控制所,北京,100052;中国疾病预防控制中心,病毒病预防控制所,北京,100052;中国疾病预防控制中心,病毒病预防控制所,北京,100052;中国疾病预防控制中心,病毒病预防控制所,北京,100052;中国疾病预防控制中心,病毒病预防控制所,北京,100052 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金（No.30470083） |
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| 摘 要： | 利用三重融合PCR法,即将3个DNA片段放在同一个反应里进行长片段PCR扩增法,融合得到了包含辛德毕斯病毒XJ-160株结构基因E3、E2、6K、3′UTR和辛德毕斯病毒YN87448株结构基因E1的融合DNA片段E3E26KE13′UTR。通过此融合片段两端引入的XbaI和XhoI酶切位点将其连接到XJ-160株的感染性全基因组cDNA克隆骨架上,成功构建了辛德毕斯病毒株XJ-160与YN87448外膜糖蛋白基因E1相互替换的嵌合病毒cD-NA克隆,命名为pBR-XJ160YE1。该克隆线性化后经体外转录,RNA转录体脂质体法转染BHK-21细胞,36h后细胞发生病变。间接免疫荧光检测到病毒蛋白的表达。提取5次传代后细胞上清中病毒RNA,RT-PCR法检测证明病毒来源于嵌合病毒cDNA克隆。此感染性辛德毕斯嵌合病毒cDNA克隆可以作为研究辛德毕斯病毒E1糖蛋白基因相关功能及XJ-160病毒和YN87448病毒存在单方向血清学反应的分子机理的分子生物学工具。
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| 关 键 词： | 辛德毕斯病毒 融合PCR 嵌合病毒 cDNA克隆 E1糖蛋白 |
| 文章编号： | 1000-8721（2006）02-0107-07 |
| 收稿时间： | 2005-08-09 |
| 修稿时间： | 2005-08-092005-09-22 |
Construction of Infectious Chimeric cDNA Clone of Sindbis Virus by Triple Fusion PCR |
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| WANG Li-hua,FU Shi-hong,TANG Qing,YANG Yi-liang,LIANG Guo-dong.Construction of Infectious Chimeric cDNA Clone of Sindbis Virus by Triple Fusion PCR[J].Chinese Journal of Virology,2006,22(2):107-113. |
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| Authors: | WANG Li-hua FU Shi-hong TANG Qing YANG Yi-liang LIANG Guo-dong |
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| Institution: | National Institute For Disease Viral Disease Control and Prevention, Chinese Center For Disease Control and Prevention, Beijing 100052, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Sindbis virus fusion PCR chimeric virus cDNA clone E1 glycoprotein |
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