| 共表达甲型流感病毒M1和HA双基因的重组腺病毒的构建及鉴定 |
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| 引用本文： | 郭建强,姚立红,陈爱珺,徐一,贾润清,薄洪,董婕,周剑芳,舒跃龙,张智清.共表达甲型流感病毒M1和HA双基因的重组腺病毒的构建及鉴定[J].病毒学报,2009,25(2):107-112. |
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| 作者姓名： | 郭建强 姚立红 陈爱珺 徐一 贾润清 薄洪 董婕 周剑芳 舒跃龙 张智清 |
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| 作者单位： | 中国疾病预防控制中心,病毒病预防控制所,病毒基因工程国家重点实验室,北京,100052;中国疾病预防控制中心,病毒病预防控制所,传染病预防控制国家重点实验室,国家流感中心,北京,100052 |
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| 摘 要： | 以我国分离的首株人H5N1亚型禽流感病毒(A/Anhui/1/2005)作为研究对象,通过引入内部核糖体进入位点序列(IRES),构建共表达H5N1亚型禽流感病毒膜蛋白基因M1和HA的重组腺病毒。PCR扩增禽流感病毒H5N1亚型M1和HA基因的全长可读框片段,先后亚克隆入pStar载体,然后扩增M1-IRES-HA片段并将其插入穿梭载体pShuttle-CMV,再与pAd-Easy载体在BJ5183菌中通过同源重组产生重组腺病毒载体,转化293细胞,包装出重组腺病毒Ad-M1/HA。将Ad-M1/HA感染293细胞,可观察到明显细胞病变效应,用免疫荧光及Western-blot方法均检测到M1和HA基因的表达。共表达M1和HA双基因的重组腺病毒的成功构建为开发新型重组腺病毒流感疫苗奠定了基础。
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| 关 键 词： | M1蛋白 血凝素 内部核糖体进入位点序列 腺病毒载体 |
Construction of Recombinant Adenovirus Co-expressing M1 and HA Genes of Influenza Virus Type A |
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| Abstract: | Based on the human H5N1 influenza virus strain A/Anhui/1/2005,recombinant adenovirus co-expressing M1 and HA genes of H5N1 influenza virus was constructed using an internal ribosome entry site(IRES) sequence to link the two genes.The M1 and HA genes of H5N1 influenza virus were amplified by PCR and subcloned into pStar vector separately.Then the M1-IRES-HA fragment was amplified and subcloned into pShuttle-CMV vector,the shuttle plasmid was then linearized and transformed into BJ5183 bacteria which containe... |
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