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蜜蜂克什米尔病毒实时荧光RT-PCR检测方法的建立和评价
引用本文:张体银,邵碧英,林素洁,郑腾,王武军,张志灯.蜜蜂克什米尔病毒实时荧光RT-PCR检测方法的建立和评价[J].病毒学报,2021,37(3):678-685.
作者姓名:张体银  邵碧英  林素洁  郑腾  王武军  张志灯
作者单位:福州海关技术中心,福建省检验检疫技术研究重点实验室,福州350003
摘    要:蜜蜂克什米尔病毒(Kashmir bee virus,KBV)是一种高毒力的急性蜜蜂病毒,可以引起蜜蜂的死亡和蜂群崩溃.本研究旨在建立一种灵敏、快速检测KBV的TaqMan实时荧光RT-PCR检测方法.参照GenBank中polymerase polyprotein有关基因序列,设计一组特异性引物和探针,并通过体外转录法制备RNA标准品作为阳性模板.在对反应体系进行优化的基础上,建立了 KBV的实时荧光RT-PCR检测方法并进行了特异性试验、敏感性试验、重复性试验和临床样本验证.结果显示:该方法能有效扩增8×100拷贝/μL~8×107拷贝/μL 的KBV标准品,建立的标准曲线呈现良好的线性关系.该方法的检测灵敏度为8拷贝/μL,对其他蜜蜂病毒不发生交叉反应,具有很好的特异性;重复性试验结果显示组内和组间的变异系数分别低于1%和2%,重复性良好.应用本研究建立方法与常规RT-PCR方法对样品进行检测,TaqMan实时荧光RT-PCR检测方法的特异性优于常规RT-PCR.本研究建立的实时荧光RT-PCR检测具有良好的敏感性、特异性和重复性,为KBV的检测和流行病学调查提供技术支持.

关 键 词:蜜蜂克什米尔病毒  实时荧光RT-PCR  检测方法

Development and Evaluation of the Detection Method of Real-time RT-PCR Assays for Kashmir Bee Virus
ZHANG Tiyin,SHAO Biying,LIN Sujie,ZHENG Teng,WANG Wujun,ZHANG Zhideng.Development and Evaluation of the Detection Method of Real-time RT-PCR Assays for Kashmir Bee Virus[J].Chinese Journal of Virology,2021,37(3):678-685.
Authors:ZHANG Tiyin  SHAO Biying  LIN Sujie  ZHENG Teng  WANG Wujun  ZHANG Zhideng
Abstract:
Keywords:
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