新城疫强毒株荧光定量RT-PCR检测技术的建立及应用 |
| |
引用本文: | 罗瑶瑶,王静静,吕艳,赵云玲,郑东霞,魏润宇,于松梅,左媛媛,张乐萃,单虎,刘华雷,王志亮.新城疫强毒株荧光定量RT-PCR检测技术的建立及应用[J].病毒学报,2018,34(4):541-549. |
| |
作者姓名: | 罗瑶瑶 王静静 吕艳 赵云玲 郑东霞 魏润宇 于松梅 左媛媛 张乐萃 单虎 刘华雷 王志亮 |
| |
作者单位: | 中国动物卫生与流行病学中心,青岛266032;青岛农业大学动物医学院,青岛266109;中国动物卫生与流行病学中心,青岛,266032;中国动物卫生与流行病学中心,青岛266032;扬州大学,扬州225009;青岛农业大学动物医学院,青岛,266109 |
| |
基金项目: | 国家重点研发计划;公益性行业(农业)科研专项 |
| |
摘 要: | 基于国内流行的新城疫病毒强毒株F蛋白裂解位点分子特征设计特异性引物及Taqman探针,建立了一种可检测新城疫强毒株的一步法实时荧光定量RT-PCR方法。通过体外转录法制备cRNA标准品作为阳性模板制作标准曲线以及临床样品的检测绘制出ROC曲线,对诊断指标进行系统评价。结果显示:该方法的标准曲线为Y=-3.390X+38.23,相关系数R~2为0.9999;灵敏度试验显示,该方法的最低检测限为2拷贝/μL,比常规RTPCR高10倍;特异性试验显示该方法与常见禽病病毒无交叉反应;重复性试验的组内和组间的变异系数分别低于1%和1.5%。通过检测1 974份临床样品绘制ROC曲线显示,ROC曲线下面积为0.9861,当Youden Index为93.12时,cutoff值设为35,诊断的敏感性和特异性分别为94.82%、98.3%,与病毒分离方法的Kappa系数为0.919。本研究建立的方法敏感性高、特异性强、重复性好、诊断准确性极好,给实验室提供一种快速、实用的检测临床样品的方法。
|
关 键 词: | 新城疫病毒(NDV) 强毒 荧光定量RT-PCR ROC曲线 |
本文献已被 CNKI 万方数据 等数据库收录! |
|