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桂花SRAP—PCR体系的确立及验证
引用本文:李梅,侯喜林,郝日明.桂花SRAP—PCR体系的确立及验证[J].植物资源与环境学报,2009,18(2).
作者姓名:李梅  侯喜林  郝日明
作者单位:1. 南京农业大学作物遗传与种质创新国家重点实验室,江苏,南京,210095;江苏省·中国科学院植物研究所,(南京中山植物园),江苏,南京,210014
2. 南京农业大学作物遗传与种质创新国家重点实验室,江苏,南京,210095
3. 南京农业大学园艺学院,江苏,南京,210095
摘    要:以桂花Osmanthus fragrans (Thunb. ) Lour. ]品种'早银桂'的总DNA为模板,对SRAP-PCR扩增体系中的模板DNA用量,Mg2+、 dNTPs和引物浓度以及Taq DNA聚合酶用量进行单因子实验, 确立了适合桂花总DNA的 SRAP-PCR反应体系:反应体系总体积10 μL,包括30 ng模板DNA、 2.5 mmol·L-1 Mg2+ 、 0.20 mmol·L-1dNTPs、 0.4 μmol·L-1上下游引物和0.75 U Taq DNA聚合酶及1×PCR buffer.采用SRAP引物组合pm21-em8,以78个桂花品种的总DNA为样品,对优化的SRAP-PCR反应体系进行初步验证,共扩增出632条带,多态性条带百分率75.32%;扩增位点15个,多态性位点百分率为86.67%.运用优化的SRAP-PCR体系,使用筛选出的18对SRAP引物组合对88个桂花品种、1个桂花野生种以及2个外类群柊树O. heterophyllus (G. Don) P. S. Green和华东木犀O. cooperi Hemsl. ]的总DNA进行扩增,共扩增出296个位点,其中多态性位点248个,多态性位点百分率为83.78%.实验结果显示,运用优化的SRAP-PCR反应体系获得的DNA条带清晰、扩增结果稳定、多态性较丰富;SRAP分子标记可用于桂花遗传多样性、品种资源鉴定、亲缘关系以及系统进化等方面的研究.

关 键 词:桂花  扩增体系  优化  验证  遗传多样性

Establishment and verification of SRAP-PCR amplification system for Osmanthus fragrans
LI Mei,HOU Xi-lin,HAO Ri-ming.Establishment and verification of SRAP-PCR amplification system for Osmanthus fragrans[J].Journal of Plant Resources and Environment,2009,18(2).
Authors:LI Mei  HOU Xi-lin  HAO Ri-ming
Abstract:
Keywords:SRAP-PCR
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