| 家蚕bHLH转录因子Bmsage可溶性表达、纯化与结构分析 |
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| 引用本文： | 何华伟,位曙光,王叶菁,刘莉娜,李珍珍,赵朋,常怀普,赵萍.家蚕bHLH转录因子Bmsage可溶性表达、纯化与结构分析[J].生物工程学报,2016,32(10):1395-1407. |
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| 作者姓名： | 何华伟 位曙光 王叶菁 刘莉娜 李珍珍 赵朋 常怀普 赵萍 |
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| 作者单位： | 1 西南大学 家蚕基因组生物学国家重点实验室，重庆 400715；2 西南大学 生物技术学院 重庆市蚕丝纤维新材料工程技术研究中心，重庆 400715,1 西南大学 家蚕基因组生物学国家重点实验室，重庆 400715,1 西南大学 家蚕基因组生物学国家重点实验室，重庆 400715；2 西南大学 生物技术学院 重庆市蚕丝纤维新材料工程技术研究中心，重庆 400715,1 西南大学 家蚕基因组生物学国家重点实验室，重庆 400715,1 西南大学 家蚕基因组生物学国家重点实验室，重庆 400715,1 西南大学 家蚕基因组生物学国家重点实验室，重庆 400715,1 西南大学 家蚕基因组生物学国家重点实验室，重庆 400715；2 西南大学 生物技术学院 重庆市蚕丝纤维新材料工程技术研究中心，重庆 400715,1 西南大学 家蚕基因组生物学国家重点实验室，重庆 400715 |
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| 基金项目： | 国家重点基础研究发展计划 (973计划) (No. 2012CB114602)，国家自然科学基金 (Nos. 31402139, 31572465)，重庆市基础科学与前沿技术研究专项 (Nos. cstc2015jcyjA00040, cstc2015jcyjBX0035)，中央高校基本科研业务费 (No. XDJK2013A019)，西南大学博士基金 (No. SWU112111) 资助。 |
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| 摘 要： | 碱性螺旋-环-螺旋(Basic helix-loop-helix,bHLH)转录因子在生命活动过程中发挥着重要的调控作用。Bmsage是家蚕丝腺中高量表达的一类bHLH转录因子,不仅参与了丝腺细胞在胚胎期的发育调控,而且对蚕丝蛋白的合成也有至关重要的调控作用,然而当前对其性质和结构了解不多。为研究其性质、结构和生物学功能,构建了NusA、MBP、SUMO、Trx和His融合标签的Bmsage重组原核表达载体,通过改变诱导温度和IPTG浓度,确定了Bmsage在大肠杆菌中可溶性表达的最佳载体和表达条件,进而通过镍柱亲和层析纯化获得了Bmsage,利用圆二色光谱研究了其二级结构。结果表明,NusA与MBP标签可显著增强Bmsage在大肠杆菌中的可溶性表达,但难以与Bmsage分离。SUMO标签有一定的助溶效果,并且能够与Bmsage有效分离。其他标签对Bmsage可溶性表达的效果不明显。圆二色光谱分析表明Bmsage含有α-helix结构,推测SUMO标签可能促进了Bmsage折叠形成类天然的结构。这些工作为深入研究Bmsage的性质、结构与功能建立了基础,同时也为其他类似蛋白的表达纯化提供了参考。
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| 关 键 词： | 碱性螺旋-环-螺旋，Bmsage，MBP，NusA，SUMO，纯化 |
| 收稿时间： | 2016/3/21 0:00:00 |
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