分子伴侣 SecB 基因和人淋巴毒素基因在大肠杆菌中的共表达

分于伴侣(Chaperohe)是细胞内催化及维持其他蛋白质正确梅象的一类蛋白质分子^1,2]。研究表明，分子伴侣参与细胞内许多蛋白质的折叠、聚合以及跨膜运输^3,4]，通过瞬时稳定其他蛋白质折叠中间体，阻止了蛋白中间体的聚集，帮助其形成正确构象^5,6]。SecB是一个胞质酸性蛋白．单体分子量为17kDa，在体内以4～6个相同亚基组成的寡聚体形式存在。它在大肠杆菌中参与蛋白质分泌系统，纯化后进行离体试验表明，它可以阻止抗蛋白酶的pre-MBP的出现，能稳定地结合前体蛋白．使其处于适合运输的构型^7]，它的作用是使蛋白质可以在正确折叠前跨过细胞膜，运输到细胞周质中。SecB通过与前体蛋白结合．从而阻止前体蛋自由于不正确折叠发生的聚集，属于分子伴侣家族的成员。分子伴侣的这些特性使得它们在基因工程中具有广阔的应用前景。外源蛋白在大肠杆菌中高表达时往往形成无活性的包涵体，包涵体大多是蛋白质在过量表达过程中不正确折叠形成的^8]，正确构象的形成需要在体外进行变性和复性。蛋白质的复性过程十分复杂，在方法上缺少一定的规律可循，特别是分子量较大以及二硫键较多的分子，复性更加困难，有的甚至根本难以复性。分子伴侣可以促进其它蛋白质的正确折叠，设想在基因工程中如果将分子伴侣基因与外源蛋白基因共存表达，可能会有效地促进外源蛋白形成正确的构象．提高其活性，减少包涵体的形成，对基因工程下游的处理带来很大方便。根 据这个思路，我们将克隆的SecB基因与重组人淋巴毒索(Lymphotoxin，简称LT)基因在同一个大肠杆菌细胞中共存表达，来研究分子伴侣SecB对外源基因表达的影响。