| 水稻N-糖酰胺酶基因 (OsPNGase A) 的克隆及在毕赤酵母中的分泌表达 |
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| 引用本文： | 王媛,贾鹏,李学俊,李玉红,陈鹏.水稻N-糖酰胺酶基因 (OsPNGase A) 的克隆及在毕赤酵母中的分泌表达[J].生物工程学报,2018,34(3):421-428. |
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| 作者姓名： | 王媛 贾鹏 李学俊 李玉红 陈鹏 |
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| 作者单位： | 1 西北农林科技大学 生命科学学院，陕西 杨凌 712100,1 西北农林科技大学 生命科学学院，陕西 杨凌 712100,1 西北农林科技大学 生命科学学院，陕西 杨凌 712100,2 西北农林科技大学 园艺学院，陕西 杨凌 712100,1 西北农林科技大学 生命科学学院，陕西 杨凌 712100 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金 (Nos. 30400282，31171606)，陕西省重点研发计划 (No. 2017NY-033) 资助。 |
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| 摘 要： | N-聚糖酶是一类广泛应用于糖蛋白的N-糖基化修饰研究中的去糖基化酶。本研究通过RT-PCR从水稻中克隆了一个高GC含量(69.48%)的N-聚糖酶基因(Os PNGase A,XM_015775832),通过无缝克隆技术构建酵母分泌型表达载体p PICZ(α)A-Os PNGase A,在毕赤酵母SMD1168H中进行诱导表达,发酵液经DEAE Sepharose阴离子交换层析和His Trap HP金属离子螯合层析纯化,产量可达到12.3 mg/L,比活力为258 U/mg。SDS-PAGE结果显示,纯化的Os PNGase A为单一条带且与预期分子量一致。Os PNGase A能作用于水稻中重组表达的人转铁蛋白(TRF)、玉米中重组表达的鸡蛋抗生物素蛋白(Avidin)以及辣根过氧化物酶(HRP),并且对Avidin的酶切效果优于商业化的PNGase F。Os PNGase A反应的最适p H和温度分别为p H 6.0和40℃,在中性和碱性以及含有100 mmol/L还原剂β-ME和DTT的条件下仍具有活性。水稻Os PNGase A的成功表达为植物糖蛋白的研究提供一个新的工具酶,酵母分泌表达体系的建立为PNGase A的大量制备奠定了基础。
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| 关 键 词： | PNGase A，基因克隆，分泌表达，糖基化 |
| 收稿时间： | 2017/6/24 0:00:00 |
Cloning of Oryza sativa N-glycanase gene (OsPNGase A) and its expression in Pichia pastoris |
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| Yuan Wang,Peng Ji,Xuejun Li,Yuhong Li and Peng Chen.Cloning of Oryza sativa N-glycanase gene (OsPNGase A) and its expression in Pichia pastoris[J].Chinese Journal of Biotechnology,2018,34(3):421-428. |
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| Authors: | Yuan Wang Peng Ji Xuejun Li Yuhong Li and Peng Chen |
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| Institution: | 1 College of Life Sciences, Northwest A&F University, Yangling 712100, Shaanxi, China,1 College of Life Sciences, Northwest A&F University, Yangling 712100, Shaanxi, China,1 College of Life Sciences, Northwest A&F University, Yangling 712100, Shaanxi, China,2 Horticulture College, Northwest A&F University, Yangling 712100, Shaanxi, China and 1 College of Life Sciences, Northwest A&F University, Yangling 712100, Shaanxi, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | PNGase A gene cloning secretory expression glycosylation |
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