| T7 RNA聚合酶基因表达系统在鱼腥藻7120中构建及hG-CSF的表达 |
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| 引用本文： | 谢雪晴,田钰琪,田敬欢,宁文艳,王春梅.T7 RNA聚合酶基因表达系统在鱼腥藻7120中构建及hG-CSF的表达[J].生物工程学报,2020,36(11):2467-2477. |
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| 作者姓名： | 谢雪晴 田钰琪 田敬欢 宁文艳 王春梅 |
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| 作者单位： | 北京中医药大学 生命科学学院，北京 102488 |
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| 基金项目： | 北京中医药大学发展基金 (No. 2020071420021)，国家自然科学基金 (No. 81774014) 资助。 |
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| 摘 要： | 外源基因的表达效率低是蓝藻基因工程发展的瓶颈之一，T7 RNA聚合酶表达系统实现了大肠杆菌中外源基因的高效表达，蓝藻与大肠杆菌同为革兰氏阴性菌，具有较高的遗传同源性，在蓝藻中构建T7 RNA聚合酶表达系统有可能提高外源基因在蓝藻中的表达效率。为了在鱼腥藻7120中构建T7 RNA聚合酶表达系统，采用重叠延伸PCR技术和酶切连接等方法构建能够表达T7 RNA聚合酶的定点整合载体pEASY-T1-F1-TacT7RNAPCmR-F2以及由T7启动子驱动hG-CSF基因表达的穿梭表达载体pRL-T7-hG-CSF；采用电击转化法将定点整合载体导入野生型鱼腥藻中，通过三亲接合的方法将穿梭表达载体转入已定点整合T7 RNA聚合酶的转基因鱼腥藻中。利用PCR技术鉴定外源基因在蓝藻中的存在；RT-PCR方法检测外源基因在蓝藻中的转录情况；Western blotting实验检测外源基因在蓝藻中的蛋白表达情况。结果表明两种载体构建成功，T7 RNA聚合酶基因和hG-CSF基因被转入鱼腥藻中，两个基因均在藻中表达，T7 RNA聚合酶表达系统在鱼腥藻中构建成功，与传统蓝藻表达系统相比，文中在鱼腥藻中构建的T7表达系统使hG-CSF基因的表达量提高2倍。该表达系统将为蓝藻基因工程的应用提供更优的工具，将促进蓝藻作为底盘细胞在合成生物学等领域的发展。
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| 关 键 词： | T7 RNA聚合酶，T7启动子，鱼腥藻Anabaena sp. PCC 7120，人粒细胞集落刺激因子，电击转化，三亲结合 |
| 收稿时间： | 2020/3/28 0:00:00 |
Construction of T7 RNA polymerase gene expression system in Anabaena sp. PCC 7120 for the expression of hG-CSF |
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| Xueqing Xie,Yuqi Tian,Jinghuan Tian,Wenyan Ning,Chunmei Wang.Construction of T7 RNA polymerase gene expression system in Anabaena sp. PCC 7120 for the expression of hG-CSF[J].Chinese Journal of Biotechnology,2020,36(11):2467-2477. |
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| Authors: | Xueqing Xie Yuqi Tian Jinghuan Tian Wenyan Ning Chunmei Wang |
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| Institution: | School of Life Sciences, Beijing University of Chinese Medicine, Beijing 102488, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | T7 RNA polymerase T7 promoter Anabaena sp PCC 7120 hG-CSF electroporation triparental conjugative transfer |
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