| 耐热链霉菌4″-O-异戊酰基转移酶基因在变铅青链霉菌TK24中的表达 |
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| 引用本文： | 张家瑚,钟晶晶,戴剑漉,王以光,夏焕章,赫卫清.耐热链霉菌4″-O-异戊酰基转移酶基因在变铅青链霉菌TK24中的表达[J].生物工程学报,2014,30(9):1390-1400. |
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| 作者姓名： | 张家瑚 钟晶晶 戴剑漉 王以光 夏焕章 赫卫清 |
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| 作者单位： | 1 沈阳药科大学生命科学与生物制药学院，辽宁 沈阳 110016;2 中国医学科学院/中国协和医科大学医药生物技术研究所 卫生部抗生素生物工程重点实验室，北京 100050;2 中国医学科学院/中国协和医科大学医药生物技术研究所 卫生部抗生素生物工程重点实验室，北京 100050;2 中国医学科学院/中国协和医科大学医药生物技术研究所 卫生部抗生素生物工程重点实验室，北京 100050;1 沈阳药科大学生命科学与生物制药学院，辽宁 沈阳 110016;2 中国医学科学院/中国协和医科大学医药生物技术研究所 卫生部抗生素生物工程重点实验室，北京 100050 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金 (No. 81172972), 中央高校基本科研业务费专项资金 (No. 2012N09) 资助。 |
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| 摘 要： | 拟研究异源调控系统提高耐热链霉菌Streptomyces thermotolerans 4″-O-异戊酰基转移酶基因(ist)表达的可能性。在麦迪霉素产生菌Streptomyces mycarofaciens 1748中曾克隆到BamHⅠ~8.0 kb片段,含此基因片段的变铅青链霉菌TK24 Streptomyces lividans TK24转化子可将螺旋霉素高效转化为丙酰螺旋霉素。序列分析表明此片段除包含麦迪霉素4″-O-丙酰基转移酶基因(mpt)外还存在与其连锁的两个正调控基因orf27和orf28。将这个基因簇中mpt基因的orf替换为ist基因的orf,然后与两个正调控基因或者单独一个orf27连接,将这些构建好的片段分别克隆到中等拷贝数及高拷贝数载体pKC1139和pWHM3上,再转化到S.lividans TK24中。通过测定S.lividans TK24转化子中螺旋霉素生物转化为4″-O-酰化螺旋霉素的产率来评价mpt和ist基因的表达水平。结果表明只有高拷贝载体pWHM3构建的重组质粒S.lividans TK24转化子中才能明显检测到4″-O-异戊酰螺旋霉素的产生。mpt基因的正调节系统可以提高ist基因的表达水平,含两个调节基因的转化子转化效率高于含单一调节基因的转化子。
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| 关 键 词： | 螺旋霉素 ″-O-酰基转移酶基因 正调控基因 异源表达 |
| 收稿时间： | 2013/11/19 0:00:00 |
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