三角酵母D-氨基酸氧化酶基因的克隆、测序及表达*

利用跨越内含子的PCR技术，三角酵母(Trigonopsos variabilis)变种FA1-10中扩增得到D-氨基酸氧化酶基因(daao)，并通过TA克隆的方法将其克隆至pGEM—T载体。序列测定结果表明，所得daao基因的5’端内含子已被删除，基因总长度为1071bp，它与Trigonopsis variabilis D-氨基酸氧化酶同源性达98.3％，与Fusarium solanii和Rhodotoru-la gracilis的同源性分别是38.9％和30.8％。为提高表达水平，又将此基因转移至高表达载体pET-28b上．在大肠杆菌BL-2l(DE3)中进行诱导表达。经IPTG诱导，目的蛋白的产生量可占菌体总蛋白量的46％，分子量约为38kD。D-氨基酸氧化酶的活力可达802u／L。