| 显微注射法制备转基因家蝇技术的建立 |
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| 引用本文： | 王蓝晨,杨阳,尚小丽,王兵,袁林,朱贵明.显微注射法制备转基因家蝇技术的建立[J].生物工程学报,2021,37(2):655-662. |
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| 作者姓名： | 王蓝晨 杨阳 尚小丽 王兵 袁林 朱贵明 |
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| 作者单位： | 1 贵州医科大学 生物与工程学院 生物与医学工程重点实验室，贵州 贵阳 550025;1 贵州医科大学 生物与工程学院 生物与医学工程重点实验室，贵州 贵阳 550025;3 贵州医科大学 基础医学院现代病原生物学特色重点实验室，贵州 贵阳 550025;2 贵州医科大学 生物与工程学院 生物技术工程研究中心，贵州 贵阳 550025;3 贵州医科大学 基础医学院现代病原生物学特色重点实验室，贵州 贵阳 550025;1 贵州医科大学 生物与工程学院 生物与医学工程重点实验室，贵州 贵阳 550025;2 贵州医科大学 生物与工程学院 生物技术工程研究中心，贵州 贵阳 550025;1 贵州医科大学 生物与工程学院 生物与医学工程重点实验室，贵州 贵阳 550025;2 贵州医科大学 生物与工程学院 生物技术工程研究中心，贵州 贵阳 550025;3 贵州医科大学 基础医学院现代病原生物学特色重点实验室，贵州 贵阳 550025 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金 (No. 315600253)，贵州省教育厅创新群体重大研究项目 (No. 黔教合KY字[2016]031)，贵州医科大学博士科研起动基金 (No. 黔J2014博合001) 资助。 |
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| 摘 要： | 旨在利用显微注射法对早期家蝇(Musca domestica L.)卵注射含有增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein,EGFP)基因的转座子载体,实现活体基因稳定表达并对其进行验证,为开展家蝇基因功能的研究奠定基础。文中自制适用于显微注射家蝇卵的硼硅酸盐玻璃微量注射针,摸索出家蝇卵壳的软化处理条件,以NanojectⅢ高精度微量注射器为主体构建适用于家蝇的显微注射技术平台;将含有眼部特异表达的3×P3启动子、EGFP的重组质粒PiggyBac-3×P3]-EGFP与稳定遗传表达辅助质粒pHA3pig helper显微注射到处理过的家蝇卵中,待羽化观察眼部发光情况,检测EGFP的表达及转录水平。结果表明,将家蝇卵在漂白水中漂洗35 s时卵的正常孵化率为55%,处理35 s的卵壳其硬度适宜注射且注射针头不易破碎;羽化后的家蝇眼部带有绿色荧光的占比约为3%,通过分子检测,家蝇的DNA和RNA中均扩增出EGFP特异片段,大小为750 bp。通过该技术平台,能够便捷、有效地实现报告基因在家蝇中的稳定表达,建立以家蝇为主体的生物反应器,为后续家蝇基因功能的研究提供一定参考价值。
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| 关 键 词： | 显微注射 家蝇 受精卵 增强型绿色荧光蛋白 转基因 |
| 收稿时间： | 2020/6/1 0:00:00 |
Preparation of transgenic Musca domestica by microinjection method |
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| Lanchen Wang,Yang Yang,Xiaoli Shang,Bing Wang,Lin Yuan,Guiming Zhu.Preparation of transgenic Musca domestica by microinjection method[J].Chinese Journal of Biotechnology,2021,37(2):655-662. |
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| Authors: | Lanchen Wang Yang Yang Xiaoli Shang Bing Wang Lin Yuan Guiming Zhu |
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| Institution: | 1 Key Laboratory of Biotechnology and Medical Engineering, School of Biology and Engineering, Guizhou Medical University, Guiyang 550025, Guizhou, China;1 Key Laboratory of Biotechnology and Medical Engineering, School of Biology and Engineering, Guizhou Medical University, Guiyang 550025, Guizhou, China;3 Key Experiments of Modern Medical Protobiology with Special Features, School of Basic Medical Sciences, Guizhou Medical University, Guiyang 550025, Guizhou, China;2 Biotechnology Engineering Research Center, School of Biology and Engineering, Guizhou Medical University, Guiyang 550025, Guizhou, China;3 Key Experiments of Modern Medical Protobiology with Special Features, School of Basic Medical Sciences, Guizhou Medical University, Guiyang 550025, Guizhou, China;1 Key Laboratory of Biotechnology and Medical Engineering, School of Biology and Engineering, Guizhou Medical University, Guiyang 550025, Guizhou, China;2 Biotechnology Engineering Research Center, School of Biology and Engineering, Guizhou Medical University, Guiyang 550025, Guizhou, China; 1 Key Laboratory of Biotechnology and Medical Engineering, School of Biology and Engineering, Guizhou Medical University, Guiyang 550025, Guizhou, China;2 Biotechnology Engineering Research Center, School of Biology and Engineering, Guizhou Medical University, Guiyang 550025, Guizhou, China;3 Key Experiments of Modern Medical Protobiology with Special Features, School of Basic Medical Sciences, Guizhou Medical University, Guiyang 550025, Guizhou, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | microinjection housefly fertilized egg enhanced green fluorescent protein genetically modified |
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