| 人源NOVA1蛋白的真核表达及其抗低氧活性鉴定 |
| |
| 引用本文： | 李华玲,吕贝,孔玲,陈欣虹,朱素娟.人源NOVA1蛋白的真核表达及其抗低氧活性鉴定[J].生物工程学报,2016,32(4):507-517. |
| |
| 作者姓名： | 李华玲 吕贝 孔玲 陈欣虹 朱素娟 |
| |
| 作者单位： | 1 扬州大学 医学院 生物化学教研室，江苏 扬州 225001,1 扬州大学 医学院 生物化学教研室，江苏 扬州 225001,1 扬州大学 医学院 生物化学教研室，江苏 扬州 225001,1 扬州大学 医学院 生物化学教研室，江苏 扬州 225001,2 扬州大学 生技学院 生物化学教研室，江苏 扬州 225009 |
| |
| 基金项目： | 国家自然科学基金 (Nos. 81100862, 8167050872) 资助。 |
| |
| 摘 要： | 构建人NOVA1基因的真核表达载体pCMV-Myc-NOVA1,转染PC12细胞后筛选最佳转染条件,进而结合细胞免疫组织化学研究NOVA1蛋白在PC12细胞中的表达分布,并探究其抗低氧活性。根据NCBI数据库NOVA1基因序列设计上下游引物,以pCR4-TOPO-NOVA1载体为模板采用聚合酶链式反应扩增获得NOVA1基因的全长c DNA编码序列,限制性内切酶SalⅠ和XhoⅠ双酶切后插入pCMV-Myc真核表达载体,酶切及直接测序验证后采用脂质体转染法转染入PC12细胞,针对转染比例和转染时间进行优化,进而采用实时定量PCR和Western blotting检测NOVA1蛋白的表达,最后采用细胞免疫组织化学检测NOVA1蛋白在PC12细胞中的表达定位及其抗低氧活性。通过酶切和直接测序验证,成功构建了真核表达载体pCMV-Myc-NOVA1;质粒和Lipo2000最佳转染比例为1:2.5,最佳转染时间为72 h;最佳转染条件下NOVA1基因和蛋白的表达水平显著增加,转染pCMV-Myc-NOVA1质粒后,NOVA1蛋白主要分布于细胞核和细胞质;过表达NOVA1的PC12细胞增殖活性明显增加。本文采用分子克隆的方法成功构建了NOVA1基因的真核表达载体,通过条件优化实现了高效表达并测定过表达NOVA1蛋白具有明显的抗低氧活性,不仅为深入揭示NOVA1蛋白的作用机理提供了重要参考,而且为NOVA1蛋白潜在的药物开发提供了重要技术支撑。
|
| 关 键 词： | 人源NOVA1蛋白 真核表达载体 转染 分布 抗低氧 |
| 收稿时间： | 2015/7/28 0:00:00 |
Eukaryotic expression of human NOVA1 protein and identification of its anti-hypoxia activity |
| |
| Hualing Li;Bei Lü;Ling Kong;Xinhong Chen;Sujuan Zhu.Eukaryotic expression of human NOVA1 protein and identification of its anti-hypoxia activity[J].Chinese Journal of Biotechnology,2016,32(4):507-517. |
| |
| Authors: | Hualing Li;Bei Lü;Ling Kong;Xinhong Chen;Sujuan Zhu |
| |
| Institution: | 1 Department of Biochemistry, Medical College of Yangzhou University, Yangzhou 225001, Jiangsu, China,1 Department of Biochemistry, Medical College of Yangzhou University, Yangzhou 225001, Jiangsu, China,1 Department of Biochemistry, Medical College of Yangzhou University, Yangzhou 225001, Jiangsu, China,1 Department of Biochemistry, Medical College of Yangzhou University, Yangzhou 225001, Jiangsu, China and 2 Department of Biochemistry, Life Science College of Yangzhou University, Yangzhou 225009, Jiangsu, China |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | human NOVA1 protein eukaryotic expression vector transfection distribution anti-hypoxia |
| 本文献已被 CNKI 等数据库收录！ |
| 点击此处可从《生物工程学报》浏览原始摘要信息 |
| 点击此处可从《生物工程学报》下载免费的PDF全文 |
|
