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| 枯草芽孢杆菌CAS15嗜铁素基因dhbC的克隆、表达及功能鉴定 | |
| 引用本文： | 余贤美,林超,郑服丛,贺春萍,张修国.枯草芽孢杆菌CAS15嗜铁素基因dhbC的克隆、表达及功能鉴定[J].生物工程学报,2009,25(6):819-825. |
| 作者姓名： | 余贤美 林超 郑服丛 贺春萍 张修国 |
| 作者单位： | 1. 山东农业大学植物保护学院,泰安,271018;中国热带农业科学院,环境与植物保护研究所,儋州,571737 2. 中国热带农业科学院,环境与植物保护研究所,儋州,571737;海南大学环境与植物保护学院,儋州,571737 3. 中国热带农业科学院,环境与植物保护研究所,儋州,571737 4. 山东农业大学植物保护学院,泰安,271018 |
| 基金项目： | 中央级公益性科研院所基本科研业务费专项(Nos.2008hzs1J013,2008hzs1J014);;国家科技支撑计划(No.2007BAD48B04);;公益性行业(农业)科研专项(No.nyhyzx07-033-2-3)资助~~ |
| 摘 要： | 通过PCR技术扩增得到dhbC基因,对其进行序列分析发现,dhbC基因片段长为1197bp,预期编码398个氨基酸,蛋白分子量大小为43.8kD。将目的片段连接到表达载体pET-30a(+),转化大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)获得重组菌株BL21(DE3)/pET-30a-dhbC,以IPTG在30oC诱导4h实现高效表达,获得一个分子量为48.8kD的融合蛋白。重组蛋白可溶性分析结果表明:融合蛋白主要为可溶性蛋白。Western blotting分析结果表明:重组蛋白可与兔抗His-tag多克隆抗体发生特异性反应,在48.8kD处有特异条带,与预期结果一致,证明重组质粒中含有dhbC基因。通过同源重组的策略将dhbC基因敲除后重新导入,验证了dhbC基因与嗜铁素的生物合成密切相关。 |
| 关 键 词： | 枯草芽孢杆菌 dhbC基因 基因克隆 序列分析 原核表达 基因敲除 |
| 收稿时间： | 2008/9/15 0:00:00 |
Cloning, expression and functional analysis of the dhbC gene from the siderophore producing bacterium Bacillus subtilis CAS15 |
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| Xianmei Yu,Chao Lin,Fucong Zheng,Chunping He and Xiuguo Zhang.Cloning, expression and functional analysis of the dhbC gene from the siderophore producing bacterium Bacillus subtilis CAS15[J].Chinese Journal of Biotechnology,2009,25(6):819-825. | |
| Authors: | Xianmei Yu Chao Lin Fucong Zheng Chunping He and Xiuguo Zhang |
| Abstract: | We amplified dhbC gene from the siderophore producing bacterium CAS15 by PCR.After ligated the PCR product to pMD18-T vector and then sequenced,we obtained a 1197 bp fragment.The blast result showed that the nucleotide acids of dhbC gene(Accession No.FJ194456) of CAS15 shared 99.7% identity with that of dhbC gene of Bacillus subtilis(GenBank Accession No.Z99120),and was predicted to encode a 43.8 kD polypeptide with 398 amino acid residues.We cloned the dhbC gene into expression vector pET-30a(+) and then t... |
| Keywords: | Bacillus subtilis dhbC gene gene cloning sequence analysis prokaryotic expression gene knockout |
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