发根农杆菌A4菌株转化苜蓿悬浮培养物

将苜蓿无菌苗下胚轴切割后，在附加2mg／L 2，4-D的MS培养基上诱导愈伤组织。愈伤组织在附加O．5mg／L 2，4-D的SH培养基中悬浮培养。悬浮培养物在用于转化之前，用0．45mol/L甘露醇处理1h．然后用O．16mol/L CaCl₂．2H₂O洗涤两次。预处理后的悬浮培养物用SH培养基悬浮(10ml／g悬浮培养物)，再加O．2ml农杆菌悬浮液，于25±2℃共培养2d。共培养的悬浮培养物洗涤后在附加0．5mg／L羧苄青霉索的无激素培养基上选择培养。悬浮培养天数、悬浮培养基激素组成和选择培养基种类明显影响转化频率。纸电泳分折表明70％的转化体可以台成农杆碱和甘露碱。染色体观察显示转化组织细胞存在严重的数目和结构变异。