Ⅰ型前胶原氨基端肽化学发光免疫分析检测方法的建立及评价

为了建立定量检测人血清中Ⅰ型前胶原氨基端肽 (Type Ⅰ procollagen N-terminal peptide，PINP) 的化学发光免疫分析检测方法，首先在谷氨酸棒状杆菌中分泌表达了PINP-α1链重组蛋白，以其为免疫原制备单抗，获得了2B10、8C12和1F11共3株可稳定分泌抗PINP-α1链的单抗杂交瘤细胞株。进一步配对筛选后，以单抗8C12偶联生物素作为捕获抗体，单抗1F11标记辣根过氧化物酶作为检测抗体，二者与样本中的PINP结合形成夹心复合物，再与包被有链霉亲和素的磁微粒形成完整的检测系统，从而定量检测人血清中PINP的浓度。对该方法进行条件优化后，确定捕获抗体、检测抗体的最佳工作浓度均为3 μg/mL，孵育时间为30 min；本方法的最低检测限为1.22 ng/mL，批内、批间的变异系数均在10%以内，线性范围为5–1 100 ng/mL，回收率在93%–107%之间。通过对160份临床样本进行检测，本方法检测结果与罗氏诊断试剂盒检测结果的相关系数R2为0.906 2。开发的磁微粒化学发光免疫分析检测方法可定量检测人血清中PINP的含量，有望成为骨骼疾病检查的辅助手段。