分枝杆菌Mycobacterium sp. NwIB-01 3-甾酮-9α-羟基化酶基因的克隆、异源表达及分离纯化 |
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引用本文: | 范书玥,魏巍,王风清,魏东芝.分枝杆菌Mycobacterium sp. NwIB-01 3-甾酮-9α-羟基化酶基因的克隆、异源表达及分离纯化[J].生物工程学报,2009,25(12):2014-2021. |
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作者姓名: | 范书玥 魏巍 王风清 魏东芝 |
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作者单位: | 华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室鲁华生物技术研究所,上海,200237 |
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基金项目: | 国家高技术研究发展计划(863计划)(No.2008AA02Z209)资助~~ |
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摘 要: | 3-甾酮-9α-羟基化酶(KSH)是微生物甾体降解途径中的关键酶,在甾体药物制备中有重要价值。以本实验室从土壤中自行筛选的分枝杆菌Mycobacterium sp.NwIB-01为出发菌株,利用红平红球菌Rhodococcus erythropolis SQ1已报道的ksh序列与已全基因组测序的分枝杆菌序列数据库进行比对分析,根据同源基因设计简并引物获得部分ksh序列,通过染色体步移扩增出全长ksh(命名为M.S.-ksh),该基因与耻垢分枝杆菌M.smegmatis mc2155的ksh同源性为85%。构建pET32-ksh表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),获得高表达重组转化子菌株,经IPTG低温诱导,SDS-PAGE电泳分析,目的蛋白主要为可溶性表达,表达量占菌体总蛋白的30%以上,用Ni2+亲和层析柱纯化,纯度达90%以上。本研究为利用基因工程菌进行工业化生产甾体药物奠定了基础。
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关 键 词: | 分枝杆菌NwIB-01 3-甾酮-9α-羟基化酶 甾体降解 异源表达 分离纯化 |
收稿时间: | 2009/9/25 0:00:00 |
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