| 毕赤酵母表达gp96-scFv抗体及生物活性测定 |
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| 引用本文： | 桂明明,武慧英,孙璐,徐亚星,赵报,李鑫,李长菲,王希东,孟颂东.毕赤酵母表达gp96-scFv抗体及生物活性测定[J].生物工程学报,2014,30(4):595-604. |
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| 作者姓名： | 桂明明 武慧英 孙璐 徐亚星 赵报 李鑫 李长菲 王希东 孟颂东 |
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| 作者单位： | 新疆农业大学农学院，新疆 乌鲁木齐 830052;中国科学院微生物研究所 中国科学院病原微生物与免疫学重点实验室，北京 100101；中国科学院大学，北京 100049;中国科学院微生物研究所 中国科学院病原微生物与免疫学重点实验室，北京 100101；中国科学院大学，北京 100049;中国科学院微生物研究所 中国科学院病原微生物与免疫学重点实验室，北京 100101；中国科学院大学，北京 100049;中国科学院微生物研究所 中国科学院病原微生物与免疫学重点实验室，北京 100101;中国科学院微生物研究所 中国科学院病原微生物与免疫学重点实验室，北京 100101；中国科学院大学，北京 100049;中国科学院微生物研究所 中国科学院病原微生物与免疫学重点实验室，北京 100101;新疆农业大学农学院，新疆 乌鲁木齐 830052;中国科学院微生物研究所 中国科学院病原微生物与免疫学重点实验室，北京 100101 |
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| 基金项目： | 北京自然科学基金 (No. KQA201105260010A)，深圳市科技创新委员会项目 (No. CYC201012290024A) 资助。 |
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| 摘 要： | 旨在利用毕赤酵母分泌表达gp96-scFv抗体,纯化后得到能特异性结合gp96抗原的小分子抗体片段(scFv)。根据gp96-scFv抗体基因序列,合成gp96-scFv抗体基因序列,将gp96-scFv抗体序列克隆到毕赤酵母表达质粒pPICZα-A,线性化的重组表达载体电转化到毕赤酵母X33,甲醇诱导目的蛋白表达,通过亲和层析法纯化目的蛋白,并以SDS-PAGE和Western blotting进行鉴定。通过Western blotting、Immunofluorescence、ELISA、FACS方法对gp96-scFv抗体的生物活性进行了检测。结果成功地构建了分泌表达抗gp96蛋白scFv抗体的毕赤酵母菌,每升毕赤酵母菌培养上清经纯化可获约50 mg gp96-scFv抗体,所获抗体其分子量大约为15 kDa,具有与gp96抗原特异性结合的活性。本研究通过毕赤酵母菌成功表达了gp96-scFv抗体,生物活性Western blotting、Immunofluorescence、ELISA、FACS分析表明该抗体能特异性结合gp96。
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| 关 键 词： | gp-scFv抗体 毕赤酵母 gp 分泌表达 亲和力 特异性 |
| 收稿时间： | 2013/8/22 0:00:00 |
Expression of anti-gp96 scFv fragment in Pichia pastoris and identification of its biological activity |
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| Mingming Gui,Huiying Wu,Lu Sun,Yaxing Xu,Bao Zhao,Xin Li,Changfei Li,Xidong Wang and Songdong Meng.Expression of anti-gp96 scFv fragment in Pichia pastoris and identification of its biological activity[J].Chinese Journal of Biotechnology,2014,30(4):595-604. |
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| Authors: | Mingming Gui Huiying Wu Lu Sun Yaxing Xu Bao Zhao Xin Li Changfei Li Xidong Wang and Songdong Meng |
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| Institution: | College of Agriculture, Xinjiang Agricultural University, Urumqi 830052, Xinjiang, China;CAS Key Laboratory of Pathogenic Microbiology and Immunology, Institute of Microbiology, Chinese Academy of Sciences (CAS), Beijing 100101, China; University of Chinese Academy of Sciences, Beijing 100049, China;CAS Key Laboratory of Pathogenic Microbiology and Immunology, Institute of Microbiology, Chinese Academy of Sciences (CAS), Beijing 100101, China; University of Chinese Academy of Sciences, Beijing 100049, China;CAS Key Laboratory of Pathogenic Microbiology and Immunology, Institute of Microbiology, Chinese Academy of Sciences (CAS), Beijing 100101, China; University of Chinese Academy of Sciences, Beijing 100049, China;CAS Key Laboratory of Pathogenic Microbiology and Immunology, Institute of Microbiology, Chinese Academy of Sciences (CAS), Beijing 100101, China;CAS Key Laboratory of Pathogenic Microbiology and Immunology, Institute of Microbiology, Chinese Academy of Sciences (CAS), Beijing 100101, China; University of Chinese Academy of Sciences, Beijing 100049, China;CAS Key Laboratory of Pathogenic Microbiology and Immunology, Institute of Microbiology, Chinese Academy of Sciences (CAS), Beijing 100101, China;College of Agriculture, Xinjiang Agricultural University, Urumqi 830052, Xinjiang, China;CAS Key Laboratory of Pathogenic Microbiology and Immunology, Institute of Microbiology, Chinese Academy of Sciences (CAS), Beijing 100101, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | gp96-scFv antibody Pichia pastoris gp96 secretory expression affinity specificity |
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