| 少根根霉Δ_-~6脂肪酸脱氢酶基因在毕赤酵母中的表达(英文) |
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| 引用本文： | 张琦,李明春,孙颖,陈有为,张飚,邢来君.少根根霉Δ_-~6脂肪酸脱氢酶基因在毕赤酵母中的表达(英文)[J].生物工程学报,2005(6). |
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| 作者姓名： | 张琦 李明春 孙颖 陈有为 张飚 邢来君 |
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| 作者单位： | 南开大学微生物学系，南开大学微生物学系，南开大学微生物学系，云南大学微生物研究所、教育部微生物资源开放研究重点实验室，昆明650091，天津中医学院，南开大学微生物学系 天津市微生物功能基因组学重点实验室，天津300071云南大学微生物研究所、教育部微生物资源开放研究重点实验室，昆明650091，天津市微生物功能基因组学重点实验室，天津300071，天津市微生物功能基因组学重点实验室，天津300071，天津300193，天津市微生物功能基因组学重点实验室，天津300071 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(No.30200176)，天津市重点自然科学基金(No.013802511)，云南省自然科学基金资助项目(No.2002C0029Q)。~~ |
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| 摘 要： | Δ6- 脂肪酸脱氢酶是一种膜整合蛋白,也是多不饱和脂肪酸合成途径中的限速酶。在前期工作中,通过RT PCR和RACE技术,从少根根霉NK300037中克隆到一个潜在编码Δ6- 脂肪酸脱氢酶的序列,序列和功能分析结果表明该序列具有一个长度为1377bp、编码由458个氨基酸组成、大小为52kD的新的Δ6- 脂肪酸脱氢酶基因。把少根根霉Δ6- 脂肪酸脱氢酶基因(RAD6)亚克隆到表达载体pPIC3.5K,构建重组表达载体pPICRAD6,并转化到毕赤酵母菌株GS115进行表达。提取酵母细胞总脂肪酸和进行甲酯化,经气相色谱和气相色谱质谱连用分析表明,目的基因的编码产物能将C16∶1、C17∶1、C18∶1、亚油酸和α- 亚麻酸在Δ6和7位间特异性脱氢而引入一个新的双键,生成更高不饱和的脂肪酸,该催化反应没有链长特异性,只有键位特异性。此外,按Kozak序列特点,改变目的基因转译起始密码子周边序列结构,并把改变后序列导入毕赤酵母GS115中进行功能表达分析,结果表明在毕赤酵母中这种改变同样能提高目的基因的表达水平。综合所有分析结果表明,巴斯德毕赤酵母更适合用来综合分析Δ6 脂肪酸脱氢酶基因的功能。
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| 关 键 词： | 少根根霉 Δ6 -脂肪酸脱氢酶基因 γ -亚麻酸 巴斯德毕赤酵母 表达 |
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