来源于Escherichia coli的高比活植酸酶基因的高效表达 |
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引用本文: | 罗会颖,姚斌,袁铁铮,王亚茹,史秀云,伍宁丰,范云六.来源于Escherichia coli的高比活植酸酶基因的高效表达[J].生物工程学报,2004,20(1). |
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作者姓名: | 罗会颖 姚斌 袁铁铮 王亚茹 史秀云 伍宁丰 范云六 |
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作者单位: | 1.中国农业科学院饲料研究所, 北京 100081; 2.中国农业科学院生物技术研究所, 北京100081 |
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摘 要: | 高效表达高比活植酸酶是进一步提高植酸酶发酵效价、降低植酸酶生产成本的一个有效途径。对源于Escherichia coli的高比活植酸酶基因appA,按照毕赤酵母(Pichia pastoris)密码子的偏爱进行了密码子优化改造。该改造后的基因appA-m按正确的阅读框架融合到毕赤酵母表达载体pPIC9上的α-因子信号肽编码序列3′端,通过电击转化得到重组转化子。对重组毕赤酵母的Southern blotting分析证实植酸酶基因已整合到酵母基因组中,并确定了整合基因的拷贝数。Northern blotting分析证实植酸酶基因得到了正常转录。SDS-PAGE分析和表达产物的研究表明,植酸酶得到了高效分泌表达,在5L发酵罐中植酸酶蛋白表达量达到2.5mg/mL发酵液, 酶活性(发酵效价)达到7.5×106IU/mL发酵液以上, 大大高于目前报道的各种植酸酶基因工程菌株的发酵效价。
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关 键 词: | 高比活植酸酶, 基因改造, 毕赤酵母, 高效表达 |
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