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| 大鼠Bdnf基因慢病毒载体的构建及其在骨髓间质干细胞中的表达 | |
| 引用本文： | 黄东煜,张志坚,陈柏龄,吴秀丽,王柠,张彦定.大鼠Bdnf基因慢病毒载体的构建及其在骨髓间质干细胞中的表达[J].生物工程学报,2007,23(2):235-240. |
| 作者姓名： | 黄东煜 张志坚 陈柏龄 吴秀丽 王柠 张彦定 |
| 作者单位： | 1. 福建医科大学附属第一医院神经内科,福州,350005;福建省神经病学研究所,福州,350005 2. 福建医科大学附属第一医院神经内科,福州,350005;福建省神经病学研究所,福州,350005;福建医科大学神经生物学中心,福州,350004 3. 福建省神经病学研究所,福州,350005 4. 福建省师范大学生命科学学院,福州,350007 |
| 基金项目： | 卫生部科学研究基金-福建省卫生教育联合攻关项目 |
| 摘 要： | 骨髓间质干细胞(MSCs)是目前基因工程正在探讨应用的靶细胞,为构建带有脑源性神经营养因子(Bdnf)基因慢病毒载体并使其在大鼠骨髓间质干细胞中表达,采用RT-PCR技术获得大鼠Bdnf基因编码区(CDS)片段,限制性内切酶酶切和基因重组构建慢病毒载体质粒PNL-BDNF-IRES2-EGFP,在脂质体介导下与包装质粒HELPER,包膜质粒VSVG共转染293T细胞包装生产慢病毒。所获慢病毒感染大鼠MSCs(rMSCs)后,PCR和免疫细胞化学法检测在rMSCs中Bdnf基因的插入和表达。结果显示所获的Bdnf基因经测序后与GenBank报道序列完全一致。重组慢病毒载体质粒PNL-BDNF-IRES2-EGFP经鉴定正确。三质粒共转染293T细胞成功,收集、浓缩病毒后测定其滴度为6.7×10~7TU/mL,PCR证实Bdnf基因插入病毒基因组。感染rMSCs后RT-PCR、免疫细胞化学染色及Western检测各组细胞均有BDNF蛋白表达,其中试验组BDNF-rMSCs更大量表达BDNF,与其余2组(Mock-rMSCs、rMSCs)比较差异具有统计学意义。构建带有Bdnf基因慢病毒载体并在大鼠骨髓间质干细胞中成功表达,为今后基因修饰干细胞的移植后长期观察研究奠定了基础。 |
| 关 键 词： | 慢病毒 骨髓间质干细胞 大鼠 |
| 文章编号： | 1000-3061(2007)02-0235-06 |
| 修稿时间： | 08 10 2006 12:00AM |
Construction of Rat Bdnf Gene Lentiviral Vector and Its Expression in Mesenchymal Stem Cells |
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| HUANG Dong-Yu,ZHANG Zhi-Jian,CHEN Bai-Ling,WU Xiu-Li,WANG Ning,ZHANG Yan-Ding.Construction of Rat Bdnf Gene Lentiviral Vector and Its Expression in Mesenchymal Stem Cells[J].Chinese Journal of Biotechnology,2007,23(2):235-240. | |
| Authors: | HUANG Dong-Yu ZHANG Zhi-Jian CHEN Bai-Ling WU Xiu-Li WANG Ning ZHANG Yan-Ding |
| Institution: | 1 Department of Neurology, The First Hospital Affiliated to Fujian Medical University,Fuzhou 350005; 2 Fujian Research Institute of Neurology, Fuzhou 350005, China; 3 Center of Neuroscience, Fujian Medical University, Fuzhou 350004, China; 4 College of Life Sciences, Fujian Normal University, Fuzhou 350007, China |
| Abstract: | |
| Keywords: | BDNF |
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