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毕赤酵母中tRNAPro CCG基因的表达及其作用效果
引用本文:彭梦,谭明,曾艳,郑宏臣,宋诙.毕赤酵母中tRNAPro CCG基因的表达及其作用效果[J].生物工程学报,2019,35(1):70-80.
作者姓名:彭梦  谭明  曾艳  郑宏臣  宋诙
作者单位:1 天津科技大学,天津 300457;2 中国科学院天津工业生物技术研究所,天津 300308,2 中国科学院天津工业生物技术研究所,天津 300308,2 中国科学院天津工业生物技术研究所,天津 300308,2 中国科学院天津工业生物技术研究所,天津 300308,2 中国科学院天津工业生物技术研究所,天津 300308
基金项目:国家自然科学基金 (No. 31701534),中国科学院重点部署项目 (Nos. KFJ-STS-ZDTP-016,KFZD-SW-211),天津市科技计划项目 (Nos. 16YFZCSY00790,16YFXTSY00530,15YFYssy00040) 资助。
摘    要:转运核糖核酸 (tRNA) 是蛋白质合成过程中重要参与成分之一,为了探索稀有密码子对应的tRNA (稀少tRNA) 丰度改变对外源基因表达量的影响,文中构建了毕赤酵母稀少tRNA基因与外源基因共表达体系。首先在GFP基因中添加由4个连续脯氨酸稀有密码子CCG组成的阻遏区,结果显示该GFP基因的表达量明显降低。然后将带有阻遏区的GFP基因和tRNAPro CCG基因顺次连接于pPIC9K载体上,在毕赤酵母GS115中共表达,结果使GFP表达量提高了4.9%;另将带有阻遏区的GFP基因和tRNAPro CCG基因分别连接于pPIC9K和pFLDα载体,在毕赤酵母GS115中共表达,GFP表达量最高提高了12.5%;应用同样方式将tRNAPro CCG基因与NFATc3T-GFP融合基因共表达,其表达量提高了21.3%。可见,tRNAPro CCG在毕赤酵母GS115中确为稀少tRNA,通过共表达tRNAPro CCG基因可显著提高带有连续该密码子的外源基因表达量,并且,文中构建的共表达体系将同样适用于其他稀少tRNA基因的筛选和验证。

关 键 词:毕赤酵母,稀少tRNA丰度,tRNAPro  CCG基因,共表达
收稿时间:2018/4/3 0:00:00

Expression of Pichia pastoris tRNAPro CCG and its function
Meng Peng,Ming Tan,Yan Zeng,Hongchen Zheng and Hui Song.Expression of Pichia pastoris tRNAPro CCG and its function[J].Chinese Journal of Biotechnology,2019,35(1):70-80.
Authors:Meng Peng  Ming Tan  Yan Zeng  Hongchen Zheng and Hui Song
Institution:1 Tianjin University of Science & Technology, Tianjin 300457, China;2 Tianjin Institute of Industrial Biotechnology, Chinese Academy of Sciences, Tianjin 300308, China,2 Tianjin Institute of Industrial Biotechnology, Chinese Academy of Sciences, Tianjin 300308, China,2 Tianjin Institute of Industrial Biotechnology, Chinese Academy of Sciences, Tianjin 300308, China,2 Tianjin Institute of Industrial Biotechnology, Chinese Academy of Sciences, Tianjin 300308, China and 2 Tianjin Institute of Industrial Biotechnology, Chinese Academy of Sciences, Tianjin 300308, China
Abstract:
Keywords:Pichia pastoris  rare tRNA abundance  tRNAPro CCG gene  co-expression
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