| hLCN6单克隆抗体偶联免疫磁珠用于混合细胞中精子的分离与法医学鉴定 |
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| 引用本文： | 陈炯,冯巍,詹飞.hLCN6单克隆抗体偶联免疫磁珠用于混合细胞中精子的分离与法医学鉴定[J].生物工程学报,2019,35(1):150-158. |
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| 作者姓名： | 陈炯 冯巍 詹飞 |
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| 作者单位： | 河南科技大学 法医学院，河南 洛阳 471023,河南科技大学 法医学院，河南 洛阳 471023,河南科技大学 法医学院，河南 洛阳 471023 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金 (No. 81501634)，河南省高等学校重点科研项目 (No. 15A340001)，河南科技大学青年科学基金 (No. 2015QN043) 资助。 |
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| 摘 要： | hLCN6 (Human lipocalin 6)是附睾特异性分泌蛋白,它能与精子结合,对精子的成熟发挥着重要作用。为了探究应用抗hLCN6单克隆抗体偶联免疫磁珠技术分离混合细胞中精子的可行性,建立混合斑中精子细胞分离的新方法,制备了不同比例的精子-上皮细胞混合悬液及混合斑样本,以生物素标记的hLCN6单克隆抗体孵育样品,再用亲和素包被的免疫磁珠捕获分离精子细胞,提取精子DNA进行PCR-STR (Short tandem repeat)分型,同时以差异裂解法提取精子,比较两者的差异。经ELISA检测,hLCN6单克隆抗体与抗原的亲和力解离常数(Kd)为3.47×10~–9 mol/L。免疫印迹和免疫荧光结果显示,hLCN6在精子中可检测到,主要定位于精子头部的顶体后区域,但不能在上皮细胞中检测到。hLCN6抗体偶联的免疫磁珠复合物能够实现精子细胞的捕获和分离,显微镜观察显示免疫磁珠能够与精子头部特异性结合。对精子个数为10~3/mL的混合悬液,STR分型成功率(正确分型13个以上,RFU200)为90%。当精子数量≥10~4/mL时,分型成功率达10~0%;对精子数分别为10~3/mL、10~4/mL、10~5/mL的混合斑STR分型成功率分别为40%、90%和10~0%。综上,hLCN6抗体偶联免疫磁珠法可以有效分离混合细胞中的精子,分型成功率高于传统的差异裂解法。该方法简单高效,可作为性侵案件中法医混合斑检验的有效补充手段。
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| 关 键 词： | hLCN6，免疫磁珠，混合斑，精子，PCR-STR |
| 收稿时间： | 2018/3/9 0:00:00 |
Separation and forensic identification of sperm from cell mixtures using anti-hLCN6 monoclonal antibody coupled magnetic beads |
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| Jiong Chen,Wei Feng and Fei Zhan.Separation and forensic identification of sperm from cell mixtures using anti-hLCN6 monoclonal antibody coupled magnetic beads[J].Chinese Journal of Biotechnology,2019,35(1):150-158. |
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| Authors: | Jiong Chen Wei Feng and Fei Zhan |
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| Institution: | Department of Forensic Biology, Henan University of Science and Technology, Luoyang 471023, Henan, China,Department of Forensic Biology, Henan University of Science and Technology, Luoyang 471023, Henan, China and Department of Forensic Biology, Henan University of Science and Technology, Luoyang 471023, Henan, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | hLCN6 immunomagnetic beads mixed stain sperm cell PCR-STR |
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